Comparação do efeito de dois protocolos de laser de baixa potência no reparo de úlceras bucais em ratos : estudo clínico e histológico

Abstract

O processo fisiológico do reparo de feridas compreende uma cascata de eventos celulares e moleculares que interagem para que ocorra a restauração da integridade tecidual, podendo esse processo ser dividido em fase inflamatória, proliferativa e de remodelamento. Lesões ulceradas na mucosa bucal são extremamente comuns e diversos protocolos terapêuticos vêm sendo utilizados, buscando aliviar a sintomatologia dolorosa e acelerar o reparo. O objetivo do presente estudo foi avaliar clínica e histopatologicamente a ação de duas densidades de energia distintas do laser de baixa potência (LBP) no reparo de úlceras bucais em ratos. Foram utilizados 72 ratos machos Wistar divididos aleatoriamente em 3 grupos experimentais: Grupo Controle 0J/cm2 (n=24), Grupo Laser 4J/cm2 (n=24), Grupo Laser 20J/cm2 (n=24). Foram realizadas úlceras traumáticas na língua dos animais utilizando instrumento punch de 3 mm. A irradiação foi realizada uma vez ao dia em contato com a ferida utilizando a técnica pontual utilizando o laser de InGaAlP (660nm, energia 40mW, spot size 0,04cm2) em dois pontos por ferida. O grupo controle foi tratado em condições idênticas exceto pelo fato que o equipamento de laser foi mantido desligado. Seis animais foram mortos em cada grupo nos dias 1, 5, 10 e 14 utilizando câmera de CO2. A língua foi removida e após a análise clínica (área da úlcera e percentual de reparo) foi fixada em uma solução de 10% de formalina tamponada durante 48 horas e em seguida corada com hematoxilina-eosina para análise histológica (reepitelização e grau de inflamação). A análise estatística foi realizada pelo teste generalizado equação de estimativa (GEE), seguida de um teste post-hoc de Bonferroni, quando necessário. O nível de significância foi de 5%. O tratamento com 4J/cm2 mostrou influenciar positivamente a reparo de feridas e a maioria das alterações significativas foram observadas após 5 dias de irradiação. Este grupo apresentou uma redução do tempo de cicatrização da úlcera associada à aceleração da cicatrização epitelial, diminuição do infiltrado neutrofílico e aumento da inflamação crônica com proliferação de fibroblastos. Com base neste estudo, concluiu-se que a terapia utilizando o LBP utilizado com a mesma potência tem capacidade de influenciar de maneira diferente a cicatrização de feridas em função da densidade de energia utilizada, e que a densidade de energia mais baixa (4J/cm2) teve melhor resposta na aceleração da reepitelização e cicatrização tecidual.

The physiological process of wound healing comprises a cascade of cellular and molecular events that interact in order to restore tissue integrity. This process can be divided in three phases: inflammatory, proliferative and remodeling. Ulcerated lesions of oral mucosa are extremely common, and different treatment protocols have been used, aiming to relieve painful symptoms and accelerate the repair. The aim of this study was to evaluate clinical and histopathological aspects of oral ulcer healing after two different power densities of low level laser treatment in rats. 72 male Wistar rats were used, randomly divided into 3 experimental groups: Control Group 0J/cm2 (n=24), Laser Group 4J/cm2(n=24), Laser Group 20J/cm2(n=24). Traumatic ulcers were made on the tongue using a punch with 3 mm of diameter. Laser irradiation was performed once a day in contact with the injury using the punctual technique by using the InGaAlP laser (660 nm, output power of 40 mW, spot size 0,04 cm2) in two points per wound. The energy density used was 4J/cm2 and 20J/cm2, during 4 and 20 seconds respectively. The control group was treated under identical conditions except that the laser equipment was kept off. Six animals were killed in each group at 1, 5, 10 and 14 days using a CO2 chamber. The tongue was removed and after clinical analysis (ulcer area and healing percentage) was fixed in a 10% buffered formalin solution for 48 h and then stained with hematoxylin-eosin for histopathological analysis (reepithelialization and inflammation). Statistical analysis was performed by the generalized equation estimation test (GEE) followed by a post-hoc Bonferroni test when necessary. The significance level was 5%. The 4J/cm2 positively influence the wound healing with most significant changes observed after 5 days of irradiation. This group exhibited a reduction in time of ulcer healing associated to acceleration of epithelial healing, decrease of neutrophilic infiltrate and increase of chronic inflammation with proliferating fibroblasts. Based on the conditions of this study, we concluded that LLLT used with the same power is capable to influence in a different way the wound healing according to the energy density used, and the lower energy density (4J/cm2) had better response in accelerating reepithelialization and tissue healing.