Características bioquímicas da quitotriosidase de indivíduos normais e pacientes com doença de gaucher com e sem tratamento

Abstract

A quitotriosidase (QT) encontra-se com sua atividade elevada em algumas doenças lisossômicas de depósito. Sendo assim, esta enzima pode ser utilizada como marcador no diagnóstico bioquímico. O objetivo deste trabalho foi estabelecer e comparar os parâmetros bioquímicos (Km, Vmáx, pH ótimo e estabilidade térmica) da QT em indivíduos com Doença de Gaucher (G) antes e depois (TG) de instituído o tratamento por reposição enzimática de modo a observarmos se ocorre uma mudança em seu comportamento. A atividade da QT foi medida em plasma utilizando-se o substrato artificial 4-metilumbeliferil-β-D-NN’N’’-triacetilquitotriosideo. Para determinação do pH ótimo variamos o pH da reação entre 3,5 a 6,8. O Km e a Vmáx foram determinados com concentrações de substrato 0,005 a 0,02mM para indivíduos normais (C), pacientes G e TG. Para os estudos de estabilidade térmica, as amostras foram pré-incubadas durante 1, 3, 5, 10 e 15 min a 50° C e 1, 3 e 5min a 60º C, na ausência de substrato. A reação enzimática foi então incubada a 37°C. Conseguimos diferenciar o grupo C do G de acordo com o Km, Vmáx e estabilidade térmica a 50 e 60°C, diferenciamos o grupo C do TG de acordo com o Km e estabilidade térmica a 60°C e diferenciamos o grupo G do TG de acordo com a Vmáx da reação. Sendo assim, a não ser através da medida da Vmáx da reação enzimática, não foi possível distinguir indivíduos com e sem tratamento ou mesmo observar a eficiência deste através de medidas de parâmetros bioquímicos desta enzima.