Desenvolvimento de ensaio de multiplex-PCR para identificação de Campylobacter jejuni e Campylobacter coli

Abstract

O gênero Campylobacter spp. é reconhecido mundialmente como uma das principais causas bacterianas de gastroenterites em humanos. Campylobacter termofílicos, principalmente o C. jejuni e com menos expressão o C. coli, são geralmente isolados desses surtos. As espécies de Campylobacter comumente são comensais do trato intestinal de aves, e produtos de origem animal são frequentemente associados em relatos de casos em infecções em humanos. Devido ao crescimento de Campylobacter ser fastidioso e suas características bioquímicas serem relativamente inertes, a diferenciação entre as espécies desse organismo através da bacteriologia convencional além de consumir tempo é muito complicada. Devido a isso, a detecção por métodos que usem como base o DNA se tornou uma alternativa para a detecção de Campylobacter. Por essa razão, a utilização da reação em cadeia pela polimerase (PCR) para identificação de C. jejuni e C. coli promove uma identificação mais confiável. Esse trabalho teve por objetivo padronizar o protocolo de multiplex-PCR para detecção de C. jejuni e C. coli. Amostras ATCC foram utilizadas para a padronização do protocolo. Com a utilização de concentrações de 2mM para MgCl2 e 1U para a Taq polimerase obteve-se os melhores resultados.

Campylobacter is now recognized worldwide as a leading cause of bacterial gastroenteritis in humans. Thermophilic Campylobacter spp., mainly C. jejuni and to a lesser extent C. coli are recognized as the most common bacteriological causes of gastroenteritis in humans. Campylobacter species are common commensals in the intestinal tracts of poultry, and food products of animal origin are frequently associated with reported cases of illness. Because of campylobacters have fastidious growth requirements and relatively inert biochemical characteristics, identification of these organisms and differentiation between species within the genus Campylobacter by cultural methods are time consuming and difficult. As pointed, nucleic acid-based detection methods became alternatives to Campylobacter detection. So certain polymerase chain reaction (PCR) based species identification methods, for both C. jejuni and C. coli provide more reliable identification. This study purposed to standardize a multiplex-PCR protocol for C. jejuni and C. coli detection. ATCC strains were used to standardize the protocol. With concentrations like 2 mM of MgCl2 and 1U of Taq polymerase the best results was obtained.