Detecção do vírus Influenza em águas residuais urbanas : uma estratégia de monitoramento e previsão de surtos

Abstract

A epidemiologia baseada em águas residuais (WBE, do inglês Wastewater-Based Epidemiology) tem se consolidado como ferramenta complementar aos métodos tradicionais de vigilância, permitindo a detecção precoce da circulação viral em comunidades. Embora essa abordagem tenha sido aplicada com sucesso no monitoramento do SARS-CoV-2, sua utilização para o vírus influenza ainda é pouco explorada. Neste estudo, investigou-se a presença de vírus influenza em amostras de águas residuais coletadas na Estação de Tratamento de Esgoto Serraria, em Porto Alegre, Brasil, durante os meses de abril, julho e agosto de 2025. As amostras foram concentradas por ultracentrifugação, o RNA foi extraído e a detecção realizada por RT-qPCR utilizando dois kits moleculares: Molecular INFA/INFB/SC2 (Bio-Manguinhos) e AgPath-ID™ One-Step RT-PCR Reagents (Thermo Fisher Scientific). Apesar do uso de controles positivos e negativos adequados, nenhuma amplificação para influenza A ou B foi observada nas amostras ambientais analisadas. Os controles negativos permaneceram sem amplificação, enquanto os positivos apresentaram resultados esperados, confirmando a validade dos ensaios. Esses achados indicam que, nas condições metodológicas empregadas, não foi possível detectar RNA de influenza nas amostras avaliadas. A ausência de detecção pode refletir baixa excreção fecal, instabilidade do RNA viral em águas residuais, presença de inibidores ou sensibilidade limitada de kits clínicos em matrizes ambientais. Os resultados evidenciam desafios importantes para a vigilância de influenza baseada em esgoto e reforçam a necessidade de protocolos otimizados para esse contexto.

Wastewater-based epidemiology (WBE) has emerged as a complementary tool to traditional surveillance methods, enabling early detection of viral circulation in communities. While WBE has been successfully applied to monitor pathogens such as SARS-CoV-2, its application to influenza virus remains poorly unclear. In this study, we investigated the presence of influenza virus in wastewater samples collected at the Serraria Wastewater Treatment Plant, in Porto Alegre (Brazil), during the months of April, July, and August 2025. Samples were concentrated by ultracentrifugation, RNA was extracted, and detection was performed by RT-qPCR using two molecular kits: the Molecular INFA/INFB/SC2 Kit (Bio-Manguinhos) and the AgPath-ID™ One-Step RT-PCR Reagents (Thermo Fisher Scientific). Despite rigorous procedures and inclusion of appropriate positive and negative controls, no amplification of influenza A was observed in any of the wastewater samples tested. Negative controls consistently showed no amplification, and positive controls amplified as expected, confirming assay validity. These findings indicate that, under the methodological conditions applied, it was not possible to detect influenza RNA in the environmental samples analyzed. The absence of detection may reflect low fecal excretion of influenza, instability of viral RNA in wastewater, or the presence of inhibitors, as well as the limited sensitivity of clinical diagnostic kits assays for environmental matrices. Our results highlight important challenges for the implementation of WBE for influenza surveillance and reinforce the need for optimized protocols tailored to environmental samples.