Avaliação de substâncias com ação antifúngica, isoladas e em associação com fármacos antifúngicos, frente a Malassezia pachydermatis in vitro e in vivo

Abstract

Malassezia pachydermatis é um fungo leveduriforme comumente encontrado na microbiota de cães saudáveis, principalmente no canal auditivo. Fatores diversos podem desencadear a patogenicidade desse microrganismo, provocando otite externa, dermatite e até mesmo doença sistêmica em animais e humanos. Azóis é a classe mais utilizada para o tratamento e a prevenção da malasseziose. Fungos resistentes aos antimicrobianos têm tornado ainda mais crítico o controle desses microrganismos, pois a incapacidade de responder à terapia antifúngica é complexa e está relacionada com fatores associados aos mesmos e ao hospedeiro. Esse cenário também decorre do número limitado de classes de fármacos antifúngicos e alvos de ação desses. Neste trabalho foi avaliada a atividade antifúngica in vitro e in vivo de azóis e da alilamina terbinafina (TRB), sozinhos e em associação com derivados da 8-hidroxiquinolina (8-HQs) – clioquinol (CQL) e as moléculas 8-hidroxiquinolina-5-(n-4-clorofenil) sulfonamida (PH151) e 8-hidroxiquinolina-5-(n-4-metoxifenil) sulfonamida (PH153), – frente a 16 isolados de M. pachydermatis. Os testes in vitro de microdiluição em caldo demonstraram que o cetoconazol (KTZ) foi o fármaco mais ativo, seguido pela TRB e pelo CQL. As associações itraconazol (ITZ)+CQL e ITZ+PH151 foram as que resultaram nas maiores porcentagens de sinergismo, e nenhuma combinação resultou em antagonismo. Em geral, o ensaio de tempo de morte demonstrou que todos os compostos antifúngicos apresentaram efeito fungicida frente a M. pachydermatis, com diminuição no tempo de morte de acordo com o aumento da concentração do fármaco. Nas avaliações in vivo, utilizando moscas Drosophila melanogaster Toll-deficientes, a TRB foi o fármaco com as maiores taxas de sobrevivência após sete dias de tratamento, seguido pelo CQL e pelo KTZ. A avaliação da carga fúngica nas moscas mortas ao final do experimentou demonstrou maior efeito fungicida dos azóis em relação aos demais fármacos. A associação de azóis ou TRB com 8-HQs não resultou em diferenças significativas em relação aos fármacos sozinhos. Com base nos resultados, conclui-se que as 8-HQs, especialmente o CQL, são potencialmente interessantes para o tratamento das infecções causadas por M. pachydermatis.

Malassezia pachydermatis is a yeast fungus commonly found in the microbiota of healthy dogs, mainly in the ear canal. Several factors can trigger the pathogenicity of this microorganism, causing external otitis, dermatitis and even systemic disease in animals and humans. Azoles are the most used class for the treatment and prevention of malasseziosis. Antimicrobial resistant fungi have made the control of these microorganisms even more critical, as the inability to respond to antifungal therapy is complex and is related to factors associated with the microorganism and the host. This scenario also stems from the limited number of classes of antifungal drugs and their targets of action. In this work, the in vitro and in vivo antifungal activity of azoles and terbinafine (TRB), an allylamine, alone and in combination with derivatives of 8-hydroxyquinoline (8-HQs) – clioquinol (CQL) and molecules 8-hydroxyquinoline-5-(n-4-chlorophenyl) sulfonamide (PH151) and 8-hydroxyquinoline-5-(n-4-methoxyphenyl) sulfonamide (PH153), – was evaluated against 16 isolates of M. pachydermatis. In vitro broth microdilution tests showed that ketoconazole (KTZ) was the most active drug, followed by TRB and CQL. The combinations itraconazole (ITZ)+CQL and ITZ+PH151 resulted in the highest percentages of synergism, and no combination resulted in antagonism. In general, the time-kill assay demonstrated that all antifungal compounds showed a fungicidal effect against M. pachydermatis, with a decrease in the time of death according to the increase in drug concentration. In in vivo evaluations using Toll-deficient Drosophila melanogaster flies, TRB was the drug with the highest survival rates after seven days of treatment, followed by CQL and KTZ. The evaluation of fungal burden in dead flies at the end of the experiment showed a greater fungicidal effect of azoles compared to other drugs. The combination of azoles or TRB with 8-HQs did not result in significant differences from the drugs alone. Based on the results, it is concluded that the 8-HQs, especially the CQL, are potentially interesting for the treatment of infections caused by M. pachydermatis.