Influência da fase do ciclo estral na expressão de HSP70 induzida por desafio térmico em células de sangue periférico de camundongas C57BL/6J : um estudo piloto

Abstract

O ciclo estral de camundongos fêmeos, composto por proestro, estro, metaestro e diestro, deve ser entendido e distinguido a fim de se observar possíveis diferenças em diversos mecanismos fisiológicos, devido a variação hormonal e citologia característica de cada fase do ciclo. A proteção do hormônio estrogênio às fêmeas, em relação a doenças metabólicas, está relacionada à capacidade deste induzir a via de choque térmico (HSR), cuja principal função é produzir HSP70, chaperona intracelular que tem papel anti-inflamatório e citoprotetor, auxiliando na resolução da inflamação sistêmica do organismo em situações de estresse celular associadas a inflamações crônicas de baixo grau. Tendo em vista a necessidade crescente de se ampliar o conhecimento do uso de fêmeas nos nossos modelos de investigação, o presente estudo piloto tem como objetivos avaliar as fases do ciclo estral de camundongos fêmeos e se existe relação com a HSR e a produção de HSP70. Foram utilizados camundongos fêmeos C57BL/6J com três meses de vida nas diferentes fases do ciclo estral, determinadas através da citologia dos lavados vaginais. O sangue coletado foi heparinizado, disperso em meio de cultura e o desafio térmico ex vivo foi realizado por 2 h a 42 °C (ou controle a 37 °C) com posterior 6 h de recuperação a 37 °C em atmosfera de 5 % CO2 em ar. As amostras foram preparadas para Western Blot por eletroforese SDS-PAGE, imunodetecção de proteínas HSP70 e Vinculina como normalizador. A imunodetecção foi realizada por quimiluminescência com uso de kit ECL e exposição ao filme fotográfico. Como resultados, observamos um efeito significativo da fase do ciclo estral na imunodetecção de HSP70 (p = 0,0455), mas não foi possível identificar em qual grupo essa tendência se encontrava. Conclui-se então que, de acordo com o nosso n amostral, a fase estral de camundongos fêmeos parece ter influência na expressão de HSP70, sendo necessários mais estudos para corroborar esse achado.

The estrous cycle of female mice, composed of proestrus, estrus, metestrus and diestrus, must be understood and distinguished in order to observe possible differences in several physiological mechanisms, due to the hormonal variation and cytology characteristic of each phase of the cycle. The protection of the estrogen hormone to females, in relation to metabolic diseases, is related to its capacity of inducing the heat shock response (HSR), whose main function is to produce HSP70, an intracellular chaperone that has an anti-inflammatory and cytoprotective action, helping in the resolution of systemic inflammation of the organism in situations of cellular stress associated with low-grade chronic inflammation. In view of the growing need to expand the knowledge of the use of females in our models of investigation, the present pilot study aims to evaluate the stages of the estrous cycle of female mice and whether there is a relationship with HSR and the production of HSP70. Female C57BL / 6J mice with three months of life were used in the different phases of the estrous cycle that were determined through cytology of vaginal lavages. The blood collected was heparinized, dispersed in culture medium and the ex vivo thermal challenge was carried out for 2 h at 42 ° C (or control at 37 ° C) with a subsequent 6 h of recovery at 37 ° C with 5% CO2 in air. The samples were prepared for Western Blot by SDS-PAGE electrophoresis, immunodetection of HSP70 proteins and Vinculin as a normalizer, and immunodetection was performed by chemiluminescence using an ECL kit and exposure to the photographic film. As a result, we observed a significant effect of the estrous cycle phase on the immunodetection of HSP70 (p = 0.0455), but it was not possible to identify in which group this tendency was found. It is concluded that, according to our sample, the estrous phase of female mice seems to have an influence on the expression of HSP70, and further studies are needed to corroborate this finding.