Avaliação de diferentes métodos de extração de proteínas de Listeria monocytogenes ATCC 7644

Abstract

As proteínas são fundamentais nos processos biológicos e estudos da sua composição, estrutura e função são importantes para compreendê-los. Estudos de proteoma envolvem diversas etapas e a preparação de amostras de qualidade é essencial. Listeria monocytogenes é uma bactéria de importância médica e sanitária, portanto análises de suas proteínas podem abordar conhecimentos acerca de seus processos fisiológicos, patogenicidade e resistência. Foram avaliados métodos de extração de proteínas totais e de superfície de L. monocytogenes ATCC 7644, a fim de verificar a eficiência, reprodutibilidade e perfil proteico do microrganismo sob condições ótimas de crescimento. As extrações de proteínas totais foram realizadas pelo método de extração com ultrassom e método de extração com nitrogênio líquido (N2), para os quais se obtiveram concentrações de proteínas variando de 0,169 a 1,890 mg/mL e 0,273 a 0,778 mg/mL, respectivamente. Para as proteínas de superfície, foram realizadas três metodologias de extração que envolveram tampão Tris Ureia + EDTA, tripsina e BICAM e tripsina e Tris, gerando concentrações de proteínas de 2,609 a 2,868 mg/mL, 3,201 a 3,790 mg/mL e 3,151 a 3,359 mg/mL, respectivamente. As amostras foram analisadas em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE) revelando que as extrações de proteínas totais foram pouco eficientes e reprodutíveis, porém a extração com N2 exibiu maior diversidade e quantidade de proteínas. As extrações de proteínas de superfície foram eficientes e reprodutíveis, sendo úteis para estudos do proteoma. A padronização de protocolos de extração é fundamental para obtenção de bons e eficientes resultados, sendo necessárias análises posteriores para identificação das proteínas.