Uso de oócitos bovinos como citoplasma receptor na produção de embriões por transferência nuclear de célula somática interespécie (NTSCi)

Abstract

Embriões clones interespécie vêm sendo produzidos por diferentes grupos de pesquisa, com relativo sucesso em algumas espécies. Oócitos bovinos maturados in vitro e enucleados por micromanipulação foram utilizados em três experimentos como citoplasma receptor na transferência nuclear de fibroblastos ovinos, caprinos e suínos. Os fibroblastos foram cultivados até a terceira passagem antes de serem congelados e utilizados. A eletrofusão foi induzida pela aplicação de um pulso de 20 V durante 45 ms. A ativação foi realizada com 5 mM de ionomicina e 2 mM de 6DMAP. Embriões NTSC bovinos, NTSCi caprinos e ovinos foram cultivados em meio SOF, e embriões NTSCi suínos foram cultivados em NCSU23. As taxas de fusão dos complexos reconstruídos com células bovinas não diferiram daquelas observadas com células ovinas (88,2%), caprinas (74,1%) e suínas (79,4%). As taxas de clivagem nos grupos NTSCi ovino (60,3%), caprino (68,4%) e suína (57,1%) não diferiram dos grupos controles NTSC bovino. A taxa de blastocisto observada nos embriões NTSCi ovinos (10,3%) foi semelhante à taxa observada no grupo NTSC bovino (12,7%). No grupo NTSCi caprino, 5,3% dos embriões chegaram ao estádio de blastocisto, enquanto que no grupo NTSCi suíno não houve desenvolvimento até o estádio de blastocisto. O citoplasma bovino foi capaz de suportar o desenvolvimento de embriões NTSCi até o estádio de blastocisto utilizando-se núcleo de fibroblatos ovinos e caprinos.

Interspecies embryo clones have been produced by research groups with relative success in some species. Bovine oocytes matured in vitro and enucleated by micromanipulation were used in three experiments as recipeient cytoplasm in nuclear transfer of ovine, caprine and porcine fibroblasts. The fibroblasts were cultivated until the third passage before being frozen and used. The electrofusion was induced by an application of a 20V pulse during 45 ms. The activation was done with 5 mM ionomycin and subsequently 2 mM 6DMAP. NTSC bovine embryos, NTSCi caprine and ovine embryos were cultivated in SOF medium and NTSCi porcine embryos were cultivated in NCSU23 medium. The fusion rates of the reconstructed complexes with bovine cells did not differ from those observed with ovine cells (88.2%), caprine cells (74.1%) and porcine cells (79.4%). The cleavage rates in ovine (60.3%), caprine (68.4%) and porcine (57.1%) NTSCi groups did not differ from the control group NTSC bovine. The blastocyst rate observed in the group of NTSCi ovine embryos (10.3%) was similar to the group of NTSC bovine embryos (12.7%). In NTSCi caprine embryos, 5.3% of the embryos developed up to the blastocyst stage, while in the NTSCi porcine group there was no development up to the blastocyst stage. In conclusion, the bovine cytoplasm was able to support the embryo development in NTSCi up to the blastocyst stage using ovine and caprine fibroblasts as donor cells.