Avaliação do envolvimento da proteína celular RAB27A no brotamento e liberação de Orthobunyavirus utilizando o vírus Oropouche como modelo

Abstract

O vírus Oropouche (OROV) pertence à família Bunyaviridae, gênero Orthobunyavirus, e é considerado o causador de uma das arboviroses com maior importância em saúde pública no Brasil. Responsável por grandes surtos em diferentes países da região equatorial da América, demonstra um elevado potencial emergente. Apesar de sua relevância, pouco se conhece quanto aspectos específicos do ciclo replicativo do OROV, pois a maior parte do conhecimento gerado sobre o gênero Orthobunyavirus provém de estudos do vírus Bunyamwera, protótipo do gênero. O presente estudo tem por objetivo elucidar mecanismos utilizados pelo OROV para a liberação de sua progênie viral, hipotetizando-se que o vírus seja capaz de manipular o sistema de secreção celular, e utilizar proteínas como Rab27a para externalizar novas partículas virais. Para testar tal hipótese, a expressão de Rab27a foi suprimida por siRNA em células HeLa anteriormente a infecção. Análises do sobrenadante dessas células 18h pós-infecção demonstraram uma diminuição do percentual de vírus liberado em relação às células não silenciadas, sugerindo que a presença de Rab27a deve ser importante para a liberação da progênie viral. Além disso, análises por imunofluorescência confocal apresentaram a proteína Rab27a em regiões adjacentes a proteínas virais na periferia das células, o que pode ser um indício de uma possível interação direta ou indireta entre tais proteínas. Para confirmar essa hipótese e compreender como ocorre essa possível relação, mais testes serão realizados.

The Oropouche virus (OROV) belongs to the Bunyaviridae family, gender Orthobunyavirus, and it causes an arboviral illness with great public health relevance in Brazil. OROV is responsible for large disease outbreaks in several countries within equatorial America and has high emerging potential. Despite its relevance, there is little knowledge concerning specific aspects of OROV replication cycle, as most of what is known about the Orthobunyavirus gender is related to Bunyamwera virus, the gender prototype. The present study aims at elucidating the mechanisms used by OROV for the release of its viral progeny, assuming that this virus is able to manipulate the cellular secretion system and use proteins such as Rab27a to externalize new viral particles. To test this hypothesis, Rab27a expression was inhibited by siRNA in HeLa cells before infection. Cell supernatant analysis 18h following infection revealed a reduction in the percentage of released virus as compared to non-silenced cells, suggesting that Rab27a might be important for viral progeny release. Furthermore, confocal immunofluorescence analyses showed that Rab27a was located in adjacent regions to viral proteins in the cell peryphery, which could indicate a possible direct or indirect interaction between such proteins. Further experiments should be done in order to confirm this hypothesis and understand the relation between those proteins.