Utilização de técnica de respirometria microbiana para avaliação de impacto ambiental : uma abordagem microbiológica para estudos em ecotoxicologia

Abstract

O crescimento acelerado da população mundial vem aumentando a preocupação com as problemáticas ambientais. Técnicas vem sendo propostas na tentativa de analisar a qualidade dos ecossistemas e avaliar possíveis impactos causados por determinadas substâncias quando em contato com o meio ambiente. Neste cenário, os ensaios ecotoxicológicos rápidos vem surgindo como aliados em momentos onde a rápida tomada de decisões se vê necessária. Análises com base em respirometria do microrganismo Pseudomonas putida foram realizadas utilizando o equipamento Baroximeter®. Um total de 368 ensaios respirométricos foram realizados com água destilada em dois equipamentos em um intervalo de 11 dias para avaliar a repetibilidade e a confiabilidade da metodologia de respirometria proposta para futuras análises ecotoxicológicas. Foram utilizados cultivos de P. putida crescidos em meio nutriente LB em 4 fases fisiológicas distintas, ápice de fase exponencial, final de fase exponencial/inicio de fase estacionária, estacionária inicial e estacionária estabilizada para avaliação do melhor estágio de crescimento para padronização metodológica. Para as análises respirométricas os cultivos foram concentrados e alíquotados em eppendorfs de 2 ml conservados em geladeira a 4 0C até o uso. A viabilidade do cultivo microbiano foi avaliada diariamente pela técnica de plaqueamento em gota até o final dos experimentos. Como resultados foram observadas diferenças entre a média de leitura respirométrica entre os dois equipamentos e uma variabilidade aleatória na janela de resultados obtidos. Foi observada a necessidade de um grande número de repetições nas medições respirométricas para que houvesse a redução da variação dos resultados. Apenas as células em ápice de fase logarítmica apresentaram mortalidade durante o período analisado indicando a centrifugação como uma forma eficiente de conservação a frio por um curto intervalo de tempo.

The rapid growth of the world population has been increasing the concern about environmental issues. Techniques have been proposed in an attempt to analyze the quality of ecosystems and evaluate possible impacts caused by certain substances when in contact with it. Under this scenario, the direct toxicity assessments come as an allied in situations when rapid decisions are needed. Assessments based on respirometric rates of the microorganism Pseudomonas putida were performed using Baroximeter®. A total of 368 respirometric tests were performed with distilled water in two devices during 11 days to assess the repeatability and reliability of the methodology proposed for future ecotoxicological analyzes. Cultures of P. putida were grown in LB nutrient medium in 4 distinct physiological stages, apex of exponential phase, late exponential phase/ early stationary phase, initial stationary phase and stabilized stationary phase to evaluate the best growth stage for methodological standardization. For respirometric analyzes, bacterial grown were concentrated and aliquoted (pellets) in 2 ml eppendorfs and stored under refrigeration at 40 C until use. The viability of the cells were evaluated daily using the method of drob plate counting until the end of the experiments. As a result were identified differences on the average respiration rates between the two respirometric equipment and random variability in the results obtained. We observed the need of a large amount of repetitions to reduce the variation of the results. Only the cells made from apex of exponential phase showed mortality during the period analyzed, indicating that centrifugation is an efficient storage method for short time conservation.