Presença da mutação no gene da diidropteroato sintetase do Pneumocystis jirovecii em pacientes com a síndrome da imunodeficiência adquirida no Brasil

Abstract

Introdução: O Pneumocystis jirovecii pode causar uma pneumonia grave (PCP) em pacientes com síndrome de imunodeficiência adquirida (SIDA). A principal opção para tratamento da PCP e para sua profilaxia é a sulfa. A presença de uma mutação no gene da diidropteroato sintase (DHPS) do P. jirovecii pode gerar uma resistência ao fármaco. Objetivo: O objetivo do estudo foi avaliar a presença da mutação DHPS e a mortalidade em pacientes com PCP e SIDA. Métodos: Foram estudadas 18 amostras de lavado bronco alveolar de pacientes adultos (idade ≥ 18 anos) com PCP e SIDA no Hospital de Clínicas de Porto Alegre (Rio Grande do Sul, Brazil) entre janeiro de 2016 e dezembro de 2017. A extração do DNA do fungo foi realizada com o PureLink™ Genomic DNA Mini Kit. Após foi realizada a reação em cadeia da polimerase (PCR) com os Primers do gene DHPS do P. jirovecii. A purificação do produto de PCR foi realizada pelo método enzimático (EXOSAP) e o sequenciamento utilizando o equipamento ABI 3500 Genetic Analyzer (Applied Biosystems). Resultados: Dez pacientes tinham diagnóstico prévio de SIDA, 5 estavam recebendo terapia antirretroviral e um realizava quimioprofilaxia para PCP. A amplificação do DNA foi positiva para o DHPS em 16 das 18 amostras. Em 15 amostras a PCR apresentou o chamado “padrão selvagem” na tipagem molecular do P. jirovecii no locus da DHPS, ou seja, ausência de mutação. Padrão duplo mutante, isto é, mutação nos códons 55 e 57 foi detectado em um paciente (6,25%), que não havia recebido profilaxia para PCP. Dois pacientes morreram na internação, um destes tinha a mutação. Conclusões: Os resultados sugerem que as mutações DHPS ainda são raras no Brasil; entretanto, as mesmas precisam ser continuamente monitoradas, uma vez a mutação pode estar associada à resistência ao TMT-SMT. A mortalidade por PCP foi significativa.

Background: Pneumocystosis is an opportunistic infection caused by the single-cell fungus Pneumocystis jirovecii, which mainly affects patients with Acquired Immunodeficiency Syndrome (AIDS), causing severe pneumonia (PCP). The combination of trimethoprim-sulfamethoxazole (TMP-SMX) is the main option for the treatment and prophylaxis of PCP. The presence of a mutation in the dihydropteroate synthase (DHPS) gene of P. jirovecii can lead to drug resistance. Aim: The objective of this study was to evaluate the presence of the DHPS mutation and mortality in patients diagnosed with PCP and AIDS. Methods: Eighteen samples of bronchoalveolar lavage were collected from adult patients (age ≥ 18 years) from the Hospital de Clínicas de Porto Alegre (Rio Grande do Sul, Brazil) between January 2016 and December 2017. Clinical data were collected from the electronic medical records. In order to evaluate the mutation, after performing the polymerase chain reaction (PCR) with DHPS gene primers of P. jirovecii, the DNA of the fungus was extracted using the PureLink ™ Genomic DNA Kit. The PCR product was purified using the enzymatic method (EXOSAP) prior to sequencing using the ABI 3500 Genetic Analyzer (Applied Biosystems). Results: Ten patients had been previously diagnosed with AIDS, five were receiving antiretroviral therapy and one had undergone chemoprophylaxis for PCP. DNA amplification was positive for DHPS in 16 of the 18 samples. In 15 samples the PCR showed the so-called "wild pattern" in the molecular typing of P. jirovecii at the DHPS locus, that is, absence of mutation. Double mutation at codons 55 and 57 was detected in one patient (6.25%), who had not received prophylaxis for PCP. Two patients died in hospital, one of them had the DHPS double mutation. Conclusion: The results suggest that DHPS mutations are still rare in Brazil; however, continuous monitoring is necessary since they may be associated with increased resistance of P. jirovecii to SMT - TMT. PCP mortality was significant.