Medicina Animal: Equinos

Análise comparada da fibrose no trato reprodutivo da égua com diferentes graus de degeneração endometrial

2026-03-19T11:01:23Z

Análise comparada da fibrose no trato reprodutivo da égua com diferentes graus de degeneração endometrial Rocha, Fabiano Trevisan da Conforme ocorre o envelhecimento na espécie equina, também é possível observar uma degeneração do trato reprodutivo especialmente no útero. Dentre as principais alterações, a substituição do endométrio por tecido fibrosado com aumento da presença de fibras de colágeno impacta diretamente na capacidade reprodutiva. O objetivo deste estudo foi realizar uma análise comparada da deposição de colágeno no endométrio, tuba uterina e ovário de éguas com diferentes graus de fibrose endometrial, correlacionando esses achados com a expressão de receptores de estrógeno, metaloproteinases de matriz (MMP-1) e 2 (MMP-2) e de seu inibidor tecidual (TIMP2). Amostras de útero, tuba uterina e ovário de éguas foram coletadas em um frigorífico. De cada órgão, foram obtidos dois fragmentos, sendo um destinado às análises histopatológica e imunohistoquímica e o outro à avaliação de expressão gênica. Com base na avaliação histológica do endométrio, as éguas foram distribuídas em dois grupos: LOW (n = 7, grau I e IIA – baixo índice de fibrose endometrial) e HIGH (n=11, grau IIB e III – alto índice de fibrose endometrial). A análise da área de colágeno tecidual corada com Picrosirius Red (PSR) revelou aumento significativo da deposição de colágeno nos órgãos estudados, com diferença entre os grupos: útero LOW (29,70%) e HIGH (43,78%); tuba uterina LOW (28,75%) e HIGH (38,66%); ovário LOW (25,08%) e HIGH (33,28%). Em contraste, a coloração por Tricômio de Masson (TM) não evidenciou diferenças significativas na deposição de colágeno entre os grupos nos órgãos avaliados: útero LOW (52,16%) e HIGH (32,16%); tuba uterina LOW (34,29%) e HIGH (32,82%); ovário LOW (38,1%) e HIGH (33,76%). A imuno-histoquímica para receptoras de estrógeno (ER), revelou maior presença desses receptores no tuba uterina de éguas com maior grau de fibrose endometrial, enquanto não foram observadas diferenças nas amostras de útero e ovário. Também não houve diferença na intensidade de marcação dos receptores entre os grupos. A maior expressão da MMP-1 foi observada no endométrio do grupo HIGH em comparação ao LOW, enquanto não foram identificadas diferenças na expressão gênica de MMP-2 e TIMP-2 entre os grupos. Foram observadas correlações positivas entre a quantificação de colágeno pela coloração de PSR nas amostras de útero e tuba uterina (r = 0.60, p = 0.008), entre útero e ovário (r = 0.49, p = 0.040), entre PSR e a quantificação de receptores de estrógeno no tuba uterina (r = 0.52, p = 0.027), bem como entre as MMP-1 e o PSR no ovário (r = 0.62, p = 0.006) e entre a expressão de ER no ovário e no útero (r = 0.58, p = 0.012), sendo todas correlações positivas. Os resultados confirmam que a coloração de PSR pode ser utilizada como método auxiliar na quantificação de colágeno para avaliação da fibrose no útero, tuba uterina e ovário. Além disso, também foi possível identificar uma progressão na deposição de fibras colágenas nesses órgãos, e as correlações observadas entre útero, tuba uterina e ovário no PSR e a expressão de MMP-1, sugerem que a deposição de colágeno pode ocorrer de forma concomitante nos diferentes órgãos reprodutivos da égua.; As horses age, degeneration of the reproductive tract, especially the uterus, can also be observed. Among the main changes, the replacement of the endometrium with fibrous tissue and an increased presence of collagen fibers directly impacts reproductive capacity. The objective of this study was to perform a comparative analysis of collagen deposition in the endometrium, oviduct, and ovary using special stains, correlating it with estrogen receptors and matrix metalloproteinases (MMP-1) and 2 (MMP-2), your tissue inhibitor (TIMP) in mares with varying degrees of endometrial fibrosis. Samples were collected at a slaughterhouse. One fragment was sent for histopathological and immunohistochemical evaluation, and the other was sent for gene expression analysis. In the histological evaluation, the mares were divided into two groups: LOW (07 mares, degree I and IIA - LOW index of endometrial fibrosis) and HIGH (11 mares, degree IIB and III - HIGH index of endometrial fibrosis). Analysis of the tissue collagen area stained with PSR revealed a significant increase in collagen deposition in the studied organs, with differences between the groups: uterus LOW (29,70%) and HIGH (43,78%); oviduct LOW (28,75%) and HIGH (38,66%); ovary LOW (25,08%) and HIGH (33,28%), analysis with Masson's Trichrome (TM) did not reveal a significant increase in collagen deposition in the studied organs between the groups: uterus LOW (52,16%) and HIGH (32,16%); oviduct LOW (34,29%) and HIGH (32,82%); ovary LOW (38,1%) e HIGH (33,76%). Quantitative immunohistochemistry of estrogen receptors (ERs) revealed a HIGH presence of receptors in the oviduct of mares with a HIGH degree of endometrosis, while no differences were observed in uterine and ovarian samples. No difference was observed in the qualitative evaluation of these receptors either. The HIGH est expression of MMP-1 was observed in the endometrium of the HIGH group compared to the LOW group. Regarding gene expression for MMP-2 and TIMP-2, no differences were identified between the groups. Strong positive correlations with statistical significance were observed between collagen quantification and PSR staining in uterine and oviduct samples (r = 0.60, p = 0.008), PSR staining between uterus and ovary (r = 0.49, p = 0.040), with PSR staining and quantification of estrogen receptors in the oviduct (r = 0.52, p = 0.027) and finally between MMP-1 and PSR in the ovary (r = 0.62, p = 0.006) and between ER in the ovary and uterus (r = 0.58, p = 0.012) all correlations were strong and positive. This research confirms that PSR staining can be used as an auxiliary method for quantifying collagen in the evaluation of uterine, oviduct, and ovarian fibrosis. It was also possible to identify a progression in collagen fiber deposition in these same organs. The main correlations found between the uterus, oviduct, and ovary in PSR and MMP-1 expression reveal that collagen deposition can occur homogeneously in the different reproductive organs of the mare.

Imunomodulação uterina no início da gestação em éguas

2026-02-15T11:03:39Z

Imunomodulação uterina no início da gestação em éguas Larentis, Gustavo Rupp O papel do sistema imune materno na patogênese da perda da prenhez inicial em éguas permanece inexplorado. Em humanos e em certas espécies animais, o equilíbrio entre linfócitos Th-1 e Th-2 é vital para a tolerância imunológica durante a gestação. Este estudo teve como objetivo avaliar a população de linfócitos T (CD3), categorizados como Th-1 (T-bet) e Th-2 (GATA3), no endométrio de éguas cíclicas e prenhes nos dias 7, 10 e 13 pós-ovulação, além de analisar a razão Th-1/Th-2 dentro dos grupos Cíclico e Prenhe. As éguas foram distribuídas aleatoriamente quanto ao dia de coleta em ambos os grupos. No primeiro ciclo, biópsias endometriais de 30 éguas cíclicas foram coletadas nos dias 7 (n = 10), 10 (n = 10) e 13 (n = 10) pós-ovulação (grupo Cíclico). No segundo ciclo, as mesmas éguas foram cobertas por um garanhão fértil, e amostras endometriais foram coletadas nos dias 7, 10 e 13 pós-ovulação, novamente com distribuição aleatória. As biópsias foram realizadas e, imediatamente após, os úteros foram lavados; aquelas nas quais um embrião foi recuperado foram incluídas no grupo Prenhe. Das 30 éguas lavadas, embriões foram recuperados de 6 éguas no dia 7, 6 no dia 10 e 6 no dia 13. Amostras de éguas sem recuperação embrionária foram excluídas de ambos os grupos. A imuno-histoquímica foi utilizada para detectar o fator de transcrição T-bet (Th-1) e o fator de transcrição GATA3 (Th-2) no endométrio. Os achados imunohistoquímicos não revelaram diferença no número de células marcadas para CD3 ao longo dos dias ou entre os grupos. Entretanto, observou-se uma diminuição no número de células marcadas para T-bet no estrato compacto do dia 7 ao dia 13, tanto no grupo Cíclico quanto no Prenhe (P = 0.017). Contudo, não foram observadas diferenças significativas (P > 0.05) entre os grupos ou em suas interações. A presença de células marcadas para GATA3 permaneceu estável ao longo dos dias avaliados. Notavelmente, um número maior de células marcadas foi identificado no grupo Prenhe em comparação ao grupo Cíclico (P < 0.05), embora não tenham sido detectadas diferenças temporais ou interações. No dia 7, o grupo Prenhe apresentou mais células T-bet do que células GATA3 (P = 0.0132), enquanto essa diferença não foi observada nos dias 10 e 13. No grupo Cíclico, células T-bet superaram consistentemente as células GATA3 em todos os dias avaliados (D7, D10, D13; P < 0.05). Além disso, a razão Tbet/ GATA3 foi significativamente maior no grupo Cíclico em comparação ao grupo Prenhe (P = 0.029). Contrariando o que havia sido previamente sugerido sobre o período de reconhecimento materno da gestação (MRP) em éguas, estes achados indicam que esse não é um período de inércia imunológica, mas sim de modulação imunológica. A mudança em direção a uma população de células Th-2 no endométrio de éguas prenhes sugere que essa transição pode desempenhar um papel crítico no desenvolvimento embrionário inicial e no reconhecimento materno da gestação.; The role of the maternal immune system in the pathogenesis of early pregnancy loss in horses remains unexplored. In humans and certain animal species, the balance between Th-1 and Th-2 lymphocytes is vital for immunological tolerance during pregnancy. This study aimed to evaluate the T lymphocyte population (CD3), categorized as Th-1 (T-bet) and Th-2 (GATA3), in the endometrium of cyclic and pregnant mares on days 7, 10, and 13 post-ovulation and to analyze the Th-1/Th-2 ratio within Cyclic and Pregnant groups. Mares were randomly assigned to the day of sample collection in both groups. In the first cycle, endometrial biopsies from 30 cyclic mares were collected on days 7 (n = 10), 10 (n = 10), and 13 (n = 10) post-ovulation (Cyclic group). In the second cycle, the same mares were bred to a fertile stallion, and endometrial samples were collected on days 7, 10, and 13 post ovulation, from mares randomly assigned again. Biopsies were performed and immediately after, uteri were flushed, and those with an embryo recovered were allotted to the Pregnant group. Of the 30 mares flushed, embryos were recovered from 6 mares on day 7, 6 on day 10, and 6 on day 13. Samples from mares without embryo recovery were excluded from both groups. Immunohistochemistry was used to detect the transcription factor T-bet (Th-1), and the transcription factor GATA3 (Th-2). proteins in the endometrium. Immunohistochemical findings revealed no difference on CD3 stained cells along the days or between groups. However, a decrease in T-bet stained cells in the stratum compactum from D7 to D13 across both Cyclic and Pregnant groups (P = 0.017). However, no significant differences (P > 0.05) were observed between the groups or their interactions. The presence of GATA3- stained cells remained stable throughout the assessed days. Notably, a higher number of stained cells was identified in the Pregnant group compared to the Cyclic group (P < 0.05), though no temporal differences or interactions were detected. On D7, the Pregnant group exhibited more T-bet cells than GATA3 cells (P = 0.0132), while this distinction was absent on D10 and D13. Within the Cyclic group, T-bet cells consistently outnumbered GATA3 cells across all assessed days (D7, D10, D13; P < 0.05). Furthermore, the T-bet/GATA3 ratio was significantly higher in the Cyclic group compared to the Pregnant group (P = 0.029). Contrary to what was previously suggested regarding the time of MRP in mares, these findings indicate that this is not a period of immunological inertness, but rather one of immunological modulation. The shift toward a Th-2 cell population in the endometrium of pregnant mares suggests that this transition may play a critical role in early embryonic development and maternal recognition of pregnancy.

Imunomodulação uterina no início da gestação em éguas

2026-02-13T10:59:28Z

Imunomodulação uterina no início da gestação em éguas Larentis, Gustavo Rupp O papel do sistema imune materno na patogênese da perda da prenhez inicial em éguas permanece inexplorado. Em humanos e em certas espécies animais, o equilíbrio entre linfócitos Th-1 e Th-2 é vital para a tolerância imunológica durante a gestação. Este estudo teve como objetivo avaliar a população de linfócitos T (CD3), categorizados como Th-1 (T-bet) e Th-2 (GATA3), no endométrio de éguas cíclicas e prenhes nos dias 7, 10 e 13 pós-ovulação, além de analisar a razão Th-1/Th-2 dentro dos grupos Cíclico e Prenhe. As éguas foram distribuídas aleatoriamente quanto ao dia de coleta em ambos os grupos. No primeiro ciclo, biópsias endometriais de 30 éguas cíclicas foram coletadas nos dias 7 (n = 10), 10 (n = 10) e 13 (n = 10) pós-ovulação (grupo Cíclico). No segundo ciclo, as mesmas éguas foram cobertas por um garanhão fértil, e amostras endometriais foram coletadas nos dias 7, 10 e 13 pós-ovulação, novamente com distribuição aleatória. As biópsias foram realizadas e, imediatamente após, os úteros foram lavados; aquelas nas quais um embrião foi recuperado foram incluídas no grupo Prenhe. Das 30 éguas lavadas, embriões foram recuperados de 6 éguas no dia 7, 6 no dia 10 e 6 no dia 13. Amostras de éguas sem recuperação embrionária foram excluídas de ambos os grupos. A imuno-histoquímica foi utilizada para detectar o fator de transcrição T-bet (Th-1) e o fator de transcrição GATA3 (Th-2) no endométrio. Os achados imuno-histoquímicos não revelaram diferença no número de células marcadas para CD3 ao longo dos dias ou entre os grupos. Entretanto, observou-se uma diminuição no número de células marcadas para T-bet no estrato compacto do dia 7 ao dia 13, tanto no grupo Cíclico quanto no Prenhe (P = 0.017). Contudo, não foram observadas diferenças significativas (P > 0.05) entre os grupos ou em suas interações. A presença de células marcadas para GATA3 permaneceu estável ao longo dos dias avaliados. Notavelmente, um número maior de células marcadas foi identificado no grupo Prenhe em comparação ao grupo Cíclico (P < 0.05), embora não tenham sido detectadas diferenças temporais ou interações. No dia 7, o grupo Prenhe apresentou mais células T-bet do que células GATA3 (P = 0.0132), enquanto essa diferença não foi observada nos dias 10 e 13. No grupo Cíclico, células T-bet superaram consistentemente as células GATA3 em todos os dias avaliados (D7, D10, D13; P < 0.05). Além disso, a razão T-bet/GATA3 foi significativamente maior no grupo Cíclico em comparação ao grupo Prenhe (P = 0.029). Contrariando o que havia sido previamente sugerido sobre o período de reconhecimento materno da gestação (MRP) em éguas, estes achados indicam que esse não é um período de inércia imunológica, mas sim de modulação imunológica. A mudança em direção a uma população de células Th-2 no endométrio de éguas prenhes sugere que essa transição pode desempenhar um papel crítico no desenvolvimento embrionário inicial e no reconhecimento materno da gestação.; The role of the maternal immune system in the pathogenesis of early pregnancy loss in horses remains unexplored. In humans and certain animal species, the balance between Th-1 and Th-2 lymphocytes is vital for immunological tolerance during pregnancy. This study aimed to evaluate the T lymphocyte population (CD3), categorized as Th-1 (T-bet) and Th-2 (GATA3), in the endometrium of cyclic and pregnant mares on days 7, 10, and 13 post-ovulation and to analyze the Th-1/Th-2 ratio within Cyclic and Pregnant groups. Mares were randomly assigned to the day of sample collection in both groups. In the first cycle, endometrial biopsies from 30 cyclic mares were collected on days 7 (n = 10), 10 (n = 10), and 13 (n = 10) post-ovulation (Cyclic group). In the second cycle, the same mares were bred to a fertile stallion, and endometrial samples were collected on days 7, 10, and 13 post ovulation, from mares randomly assigned again. Biopsies were performed and immediately after, uteri were flushed, and those with an embryo recovered were allotted to the Pregnant group. Of the 30 mares flushed, embryos were recovered from 6 mares on day 7, 6 on day 10, and 6 on day 13. Samples from mares without embryo recovery were excluded from both groups. Immunohistochemistry was used to detect the transcription factor T-bet (Th-1), and the transcription factor GATA3 (Th-2). proteins in the endometrium. Immunohistochemical findings revealed no difference on CD3 stained cells along the days or between groups. However, a decrease in T-bet stained cells in the stratum compactum from D7 to D13 across both Cyclic and Pregnant groups (P = 0.017). However, no significant differences (P > 0.05) were observed between the groups or their interactions. The presence of GATA3-stained cells remained stable throughout the assessed days. Notably, a higher number of stained cells was identified in the Pregnant group compared to the Cyclic group (P < 0.05), though no temporal differences or interactions were detected. On D7, the Pregnant group exhibited more T-bet cells than GATA3 cells (P = 0.0132), while this distinction was absent on D10 and D13. Within the Cyclic group, T-bet cells consistently outnumbered GATA3 cells across all assessed days (D7, D10, D13; P < 0.05). Furthermore, the T-bet/GATA3 ratio was significantly higher in the Cyclic group compared to the Pregnant group (P = 0.029). Contrary to what was previously suggested regarding the time of MRP in mares, these findings indicate that this is not a period of immunological inertness, but rather one of immunological modulation. The shift toward a Th-2 cell population in the endometrium of pregnant mares suggests that this transition may play a critical role in early embryonic development and maternal recognition of pregnancy.

Caracterização biológica do plasma rico em plaquetas para uso na clínica reprodutiva equina

2026-01-28T10:58:17Z

Caracterização biológica do plasma rico em plaquetas para uso na clínica reprodutiva equina Oliveira, Joel Neves de Dentre os métodos para obtenção de hemocomponentes a serem utilizados na clínica reprodutiva equina, destaca-se o do plasma rico em plaquetas (PRP), o qual, assim como na medicina regenerativa, está ganhando espaço no tratamento de enfermidades, principalmente em razão de ser uma dose suprafisiológica de plaquetas. Este estudo tem, por objetivo, padronizar e validar dois protocolos abertos de coleta de sangue total para a produção de PRP, realizar a classificação desse produto biológico, avaliar a sua inocuidade, e por fim qual protocolo seria o, menos laborioso para ser utilizado, como opção de tratamento em enfermidades reprodutivas equinas. Foram selecionados 10 equinos, de diferentes raças, idades e sexo, realizados 4 protocolos (P1, P2, P3 e P4), sendo os P1 e P2 protocolos que utilizam o sistema fechado de coleta de sangue, e os P3 e P4 os que utilizam o sistema aberto de coleta de sangue, sendo estes os que se objetivou padronizar e validar. Observou-se que todos os protocolos podem ser considerados plasma rico em plaquetas puro, todos tiveram resultado negativo para a presença de contaminantes bacterianos e, na composição final do plasma rico em plaquetas puro, todos os protocolos apresentaram baixa concentração de eritrócitos e leucócitos. Os protocolos P3 e P4 foram os que tiveram uma recuperação máxima de plaquetas com uma concentração, respectivamente, de 2,6 e 3,3 vezes a concentração basal. Não foi observada perda da integridade ou viabilidade das plaquetas no produto final dos protocolos mencionados, pois não foram observadas grandes quantidades de agregados plaquetários, assim, o protocolo aberto de coleta de sangue total permite a adequada padronização e operacionalização no meio veterinário, por ser um protocolo em que se manipula um volume maior de plasma, possibilitando menor erro humano na execução, aliado à não contaminação do produto biológico, resultando em qualidade dos componentes, maior quantidade de plaquetas e baixa quantidade de leucócitos no produto final, demonstrando, mais uma vez, consistência para uma futura aplicabilidade dentro da clínica reprodutiva equina.; Among the methods for obtaining blood components to be used in equine reproductive practice, platelet-rich plasma (PRP) stands out, which, as in regenerative medicine, is gaining ground in the treatment of diseases, mainly because it provides a supraphysiologic dose of platelets. This study aims to standardize and validate two open protocols for whole blood collection for PRP production, to classify this biological product, assess its safety, and finally, determine which protocol would be the least laborious to use as a treatment option for equine reproductive diseases. Ten equines of different breeds, ages, and sexes were selected, and 4 protocols were performed (P1, P2, P3, and P4), with P1 and P2 being protocols that use the closed blood collection system, and P3 and P4 those that use the open blood collection system, the latter being the ones this study aimed to standardize and validate. It was observed that all protocols can be considered pure platelet-rich plasma, all tested negative for the presence of bacterial contaminants, and in the final composition of the pure platelet-rich plasma, all protocols showed a low concentration of erythrocytes and leukocytes. Protocols P3 and P4 had the maximum platelet recovery with a concentration of 2.6 and 3.3 times the baseline concentration, respectively. No loss of integrity or viability of the platelets was observed in the final product of the mentioned protocols, as no large quantities of platelet aggregates were observed. Thus, the open protocol for whole blood collection allows for adequate standardization and operationalization in the veterinary field, as it is a protocol in which a larger volume of plasma is handled, enabling less human error in execution, combined with the non-contamination of the biological product. This results in the quality of the components, a higher quantity of platelets, and a low quantity of leukocytes in the final product, demonstrating, once again, consistency for future applicability within equine reproductive practice.