Expressão gênica de moléculas associadas ao podócito em pacientes portadores de glomerulopatias proteinúricas

Abstract

Introdução: A injúria ao podócito glomerular tem um papel crítico para o surgimento de proteinúria em diferentes glomerulopatias. Neste estudo avaliamos a expressão gênica das proteínas associadas ao podócito em biópsias renais e na urina simultaneamente em pacientes com glomerulopatias proliferativas (GPP) e não proliferativas (GPNP) proteinúricas, assim como a efeito do tratamento imunossupressor sobre a expressão destas moléculas. Material e Métodos: Setenta e cinco pacientes adultos foram incluídos, 35 com diagnóstico de GPNP e 41 casos de GPP. Vinte e um indivíduos sem doença renal foram incluídos como controles. O RNAm foi quantificado no tecido renal (basal) e em células do sedimento urinário (na biópsia, aos 6 e 12 meses) dos genes nefrina, podocina, podocalixina, sinaptopodina e alfa actinina-4 por PCR em tempo real. A expressão gênica foi correlacionada com a proteinúria e a função renal, e a variação do RNAm ao longo do tempo foi comparada entre os grupos pela Equação de Estimativas Generalizadas. Resultados: O RNAm dos genes (exceto da sinaptopodina) no tecido estava significativamente reduzido no grupo GPNP. No grupo GPP, a expressão também foi menor, mas apenas o gene da podocina teve diferença estatística comparado aos controles. Em paralelo, o RNAm dos mesmos genes na urina basal foi mais elevado nos pacientes, e mais marcadamente no grupo GPP. Após seis meses de tratamento imunossupressor associado ou não a inibidores da angiotensina, no grupo GPP houve uma redução significativa da expressão de podocina, podocalixina e alfa actinina-4 aos 6 e 12 meses quando comparando ao nível basal (p<0,001). No grupo GPNP, apenas a alfa actinina-4 diminuiu (p=0,008) com uma tendência de redução da podocalixina (p=0,08). Verificou-se uma forte correlação entre os genes na biópsia (exceto com sinaptopodina), mas na urina esta correlação foi fraca. Houve correlação moderada mas significativa dos genes na urina com a proteinúria basal e dos 6 meses, mas nenhum gene correlacionou-se com a taxa de filtração glomerular. Conclusão: Nestes pacientes com glomerulopatias proteinúricas em fase aguda de doença, a expressão gênica de proteínas associadas ao podócito estava reduzida na biópsia renal concomitante com aumento da excreção urinária, sugerindo a presença de podocitopenia intra-renal e podocitúria, respectivamente. O RNAm destes genes reduziu em paralelo com a proteinúria com o uso de imunossupressores, sugerindo reorganização estrutural dos podócitos. Os resultados deste estudo não são conclusivos sobre diferenças qualitativas da podocitopatia com base em tipos histológicos específicos.

Introduction: Injury to the glomerular podocyte has a critical role in the development of proteinuria in different glomerulopathies. In this study, gene expression of podocyte-associated proteins was evaluated in kidney biopsies and urine simultaneously in patients with proliferative (PGP) and non proliferative (NPGP) glomerulopathies. The effect of immunosuppressive treatment on the expression of these molecules was also studied. Material and Methods: Seventy-five adult patients were included, 35 with NPGP and 41 cases of PGP. Twenty-one individuals without renal disease were included as controls. The mRNA was quantified by real time PCR in renal tissue (baseline) and in urinary sediment cells (at biopsy, at 6 and 12 months) for the following genes: nephrin, podocin, podocalyxin, synaptopodin and alpha actinin-4. Gene expression was correlated with proteinuria and renal function, and variation in mRNA levels over time was compared between groups by Generalized Estimating Equation. Results: The mRNA of all genes (except synaptopodin) in renal tissue was significantly decreased in NPGP group. In the PGP, this expression was also lower, but only podocin had statistical difference as compared to controls in parallel, mRNA of the same genes was increased in baseline urine of the patients, but more markedly in PGP group. After six months of immunosuppressive treatment, with or without angiotensin inhibitors, there was a significative reduction in urinary expression of podocin, podocalyxin and alpha actinin-4 at 6 and 12 months as compared to baseline levels. In the NPGP group, only alpha actinin-4 decreased in the urine (p=0,008) and there was also a trend to reduction of podocalyxin (p=0,08). There was a strong correlation between all genes (except for synaptopodin) in biopsy, but in the urine this correlation was weak. There was also a moderate but significative correlation between urinary genes and baseline and six-month proteinuria, but no gene correlated with glomerular filtration rate. Conclusion: In these patients with proteinuric glomerulopathies in the acute phase of disease, gene expression of podocyte-associated proteins was decreased in kidney biopsy concurrent with increased levels in the urine, suggesting the presence of intra-renal podocytopenia and podocyturia respectively. The mRNA of these genes decreased in parallel with proteinuria along with immunosuppressive treatment, suggesting structural reorganization of podocytes. The findings of this study cannot be conclusive about qualitative differences of the podocytopathy based on specific histologic types.