Confecção e seleção in vitro de mutantes com virulência atenuada de cepa apec por mutagênese marcada com assinatura

Abstract

A Escherichia coli patogênica aviária (APEC) é o principal agente da colibacilose aviária. Ainda não há um patotipo estabelecido para APEC, mas diversos genes associados à virulência já foram descritos para essa bactéria. Dentre as diversas cepas estudadas de APEC, destaca-se a MT 78, que possui 20 de 33 fatores associados à virulência testados, causa morte celular em macrófagos aviários e é capaz de invadir células não-fagocitárias (fibroblastos aviários de linhagem). Para investigar qual gene da MT 78 é essencial para que a cepa invada células não-fagocitárias, foi construída uma biblioteca de 1800 mutantes dessa cepa, através da técnica de mutagênese marcada com assinatura (STM). Foram feitos ensaios de invasão com metade dos mutantes (900); a outra metade também será testada. Os ensaios consistem na infecção de fibroblastos aviários de linhagem e recuperação das bactérias intracelulares após 4 horas; o DNA dos mutantes será extraído e será possível detectar quais os mutantes presentes na infecção e ausentes na recuperação dos experimentos. Esses mutantes serão investigados devido à perda da capacidade de invasão. Será possível descobrir qual(is) o(s) gene(s) que sofreu(ram) mutação, e fazer ensaios moleculares com os mutantes atenuados. Os principais resultados desse trabalho, até o momento, são a construção da biblioteca de mutantes e a padronização da técnica de STM in vitro.