Avaliação in vitro do efeito de diferentes soluções irrigadoras sobre o biofilme bacteriano : uma análise por meio da microscopia confocal

Abstract

O objetivo do presente trabalho foi avaliar, in vitro, a efetividade de duas soluções irrigadoras endodônticas e de sua associação na desinfecção de canais radiculares bovinos infectados com Enterococcus faecalis através da Microscopia de Varredura a Laser Confocal (MVLC). Foram selecionados 21 incisivos bovinos; em 18 desses foi inoculada uma monocultura de Enterococcus faecalis por 21 dias. Após esse período, os dentes foram randomicamente divididos em três grupos testes (n=5) de acordo com a substância química irrigadora utilizada para o preparo químico-mecânico dos canais radiculares: grupo 1 (G1) – hipoclorito de sódio (NaOCl) 2,5%, grupo 2 (G2) - clorexidina (CX) 2% gel, grupo 3 (G3) - NaOCl 2,5% + CX 2% gel; e em dois grupos controles (GC) (n=3): grupo controle negativo (GCN) - sem preparo e esterilizados e grupo controle positivo (GCP) - sem preparo e contaminado. Finalizada essa etapa, as amostras foram coradas com SYTO9 e iodeto de propídeo e submetidas à análise por meio da MVLC. Para a tabulação dos resultados, foram padronizados escores segundo a viabilidade bacteriana: 0 = ≤ 25% de bactérias viáveis, 1 = >25% e < 50%, 2 = 50%, 3 = > 50% e < 75% e 4 = ≥ 75%. A avaliação foi realizada por um único examinador calibrado e cego. A análise estatística foi realizada por meio dos testes de Kruskal-Wallis e Mann-Whitney com nível de significância de 5%. O GCP apresentou escores 2 e 3; o GCN exibiu escore 0 em todas as amostras - p<0,05 (todas a bactérias estavam inviáveis); o G1 apesar de ter demonstrado eficiência em remover a grande totalidade do biofilme, foi classificado com escore 4 pois as bactérias restantes estavam viáveis - p<0,05; o G2 apresentou a maior parte dos escores equivalente a 3, mas apresentou inferior potencial de limpeza dos canais radiculares comparado ao G1; e o G3 foi classificado principalmente com escores entre 2 e 3, apresentando o melhor resultado, já que exibiu mínima quantidade bacteriana, semelhante ao G1, e um número de microrganismos inviáveis superior ao mesmo grupo (p=0,01), devido à ação adicional da CX. A irrigação final com o uso da clorexidina, portanto, demonstrou maior atividade antibacteriana.

The purpose of this study was to evaluate in vitro the effectiveness of two endodontic irrigants and their association on disinfection of root canals of infected bovine teeth with Enterococcus faecalis by Confocal Laser Scanning Microscope (CLSM). Twenty-one bovine incisors were selected; in 18 teeth were inoculated a monoculture of Enterococcus faecalis for 21 days. After this period, the teeth were randomly divided into three test groups (n = 5) according to the chemical solution used for irrigation during the chemo-mechanical preparation: group 1 (G1) - 2.5% sodium hypochlorite (NaOCl), group 2 (G2) - 2% chlorhexidine (CHX) gel, group 3 (G3) - 2.5% NaOCl + 2% CHX gel; and two control groups (GC) (n = 3): negative control group (GCN) - sterile and without prepare of root canals and positive control group (GCP) - root canal infected. Afterwards, the samples were stained with SYTO9 and propidium iodide and subjected to analysis by CLSM. Scores were standardized according to the bacterial viability to tabulate the results: 0 = ≤ 25% of viable bacteria, 1 = > 25% and < 50%, 2 = 50%, 3 = > 50% and < 75% and 4 = ≥ 75%. The evaluation was performed by one blinded and calibrated examiner. Statistical analysis was performed using the Kruskal-Wallis and Mann-Whitney test with a significance level of 5%. The GCP showed scores 2 and 3; GCN exhibited score 0 in all samples - p<0.05 (all bacteria were not viable); although G1 has shown great efficiency in removing the entire biofilm, was ranked with score 4 because the bacteria were viable - p<0.05; G2 showed the majority of scores equal to 3, but had less potential for cleaning the root canals compared to G1; G3 was rated with scores between 2 and 3 mostly presenting the best result; this last group had a minimal bacterial quantity similar to G1 and a shorter number of viable microorganisms to the same group (p=0.01) due to the additional action of CHX. Therefore the fi