Estudos proteômicos da semente de canavalia ensiformis

Abstract

As sementes da leguminosa Canavalia ensiformis contém isoformas da enzima urease. Estas isoformas possuem atividade independente da atividade ureolítica, como a toxicidade para insetos de diferentes ordens. Esta toxicidade está relacionada à hidrólise das isoformas de urease por peptidases acídicas, tipo aspártico e cisteíno peptidases, com consequente liberação de um peptídeo entomotóxico. As sementes foram extraídas em tampão Tris(hidroximetil)aminometano - HCl (Tris-HCl) 20 mM pH 7,5. Em seguida foi feita a retirada da proteína concanavalina-A (Con-A), uma lectina abundante nas sementes e presente nos extratos, através de cromatografia de afinidade por Sephadex G-100®. A remoção da principal proteína de reserva, a canavalina, foi avaliada com diferentes abordagens de imunoprecipitação. Na espectrometria de massas, os peptídeos são separados em um sistema nanoACQUITY UltraPerformance LCTM. Após a ionização (modo positivo), os íons gerados são analisados em um espectrômetro Q-TOF Micro™, e a identificação das proteínas, a partir dos espectros coletados no MS2 para cada ponto são posteriormente analisados.