Comparação do uso de microtubos de diferentes marcas em qPCR

Abstract

A técnica de reação em cadeia da polimerase quantitativa em tempo real (qPCR) é utilizada na rotina de laboratórios de pesquisa e diagnóstico, sendo um ensaio com maior sensibilidade e especificidade quando comparado a outros testes. Na medicina veterinária, a qPCR tem sido aplicada para realizar diagnósticos, como por exemplo, de anaplasmose, babesiose, FIV e FeLV. Porém, é uma técnica de maior custo, no geral, se comparada a outros métodos de detecção, como os testes de ELISA, limitando o seu uso. Dessa forma, se faz necessário a busca por alternativas de tornar o ensaio mais barato. O objetivo deste estudo foi comparar a eficácia de duas marcas comerciais de microtubos em qPCR. Para isto foram realizados ensaios de qPCR de genes constitutivos de carrapatos fêmeas de Rhipicephalus microplus utilizando duas marcas de microtubos de preços diferentes. Os resultados foram comparados usando o teste Mann-Whitney a partir da média e desvio-padrão obtidos a partir do valor de Ct de cada reação. Foi observado que ambos microtubos apresentaram a mesma eficácia para realização da qPCR, sendo o microtubo da marca B mais barato que a marca A. Como conclusão, foi mostrado que é possível alterar a marca do tubo, para um mais barato, sem comprometer a qualidade da qPCR.

The real-time quantitative polymerase chain reaction (qPCR) technique is routinely used in research and diagnostic laboratories, offering greater sensitivity and specificity compared to other tests. In veterinary medicine, qPCR has been applied for diagnoses such as anaplasmosis, babesiosis, FIV and FeLV. However, it is a more expensive technique, generally when compared to other detection methods, such as ELISA tests, which limit its use. Therefore, it is necessary to seek alternatives to reduce the cost of the assay. This study aimed to compare the efficacy of two commercial brands of microtubes in qPCR reactions. For this purpose, qPCR assays of housekeeping genes of Rhipicephalus microplus tick were performed using two brands of microtubes with different price ranges. The results were compared using the Mann-Whitney test based on the mean and standard deviation obtained from the Ct values of each reaction. It was observed that both microtubes exhibited the same efficacy for qPCR, with brand B being cheaper than brand A. In conclusion, it was demonstrated that switching to a lower cost microtube brand does not compromise qPCR quality.