Desenvolvimento de metodologia analítica para determinação de dapagliflozina em comprimidos e avaliação de seu perfil de impurezas

Abstract

A dapagliflozina (Forxiga®) é o primeiro fármaco de uma nova classe de agentes utilizados no tratamento de pacientes com Diabetes Mellitus tipo 2. Pela inibição da proteína co-transportadora de glicose SGLT2 nos rins, a dapagliflozina reduz a reabsorção de glicose, levando a um aumento em sua excreção urinária e consequente redução em seus níveis séricos. Os estudos de desenvolvimento de métodos analíticos para avaliação da dapagliflozina, bem como de suas substâncias relacionadas, ainda são escassos frente a sua importância para o controle de qualidade de medicamentos. Assim, o presente trabalho teve como objetivos o desenvolvimento e a validação de metodologia analítica para a quantificação da dapagliflozina em comprimidos e determinação de seu perfil de impurezas. Foram desenvolvidos métodos para determinação da dapagliflozina por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) e por eletroforese capilar (EC). Ambos foram validados de acordo com os parâmetros de especificidade, linearidade, limites de detecção e quantificação, precisão, exatidão e robustez, e apresentaram resultados satisfatórios conforme preconizado nos guias oficiais. O método por CLAE apresentou vantagens como baixos limites de detecção e quantificação da substância ativa e rapidez na análise, enquanto o método por EC se destacou pelo seu baixo custo e reduzida geração de resíduos. Ademais, foi desenvolvido e validado, seguindo os mesmos parâmetros citados anteriormente, um método por cromatografia líquida de ultraeficiência (CLUE) para a determinação simultânea da dapagliflozina na presença de três impurezas relacionadas. O método apresentou resultados adequados para a separação, detecção e quantificação dessas substâncias em um reduzido tempo de análise, e atendeu a todos os requisitos da validação analítica. O O potencial tóxico das impurezas e do fármaco foi avaliado e foram obtidos resultados de citotoxicidade que indicaram diferentes graus de citotoxicidade entre as impurezas após 24 e 96 horas de exposição, em diferentes concentrações. Dano ao DNA não foi observado em nenhumas nas concentrações testadas.

Dapagliflozin (Forxiga®) is the first in a novel class of agents used in the treatment of patients with type 2 Diabetes Mellitus. By inhibiting the glucose co-transporter protein SGLT2, the dapagliflozin reduces renal glucose reabsorption by the kidney, leading to an increase in its urinary excretion and consequent reduction in blood glucose levels. Development studies of analytical methods for analysis of dapagliflozin and its related substances are still limited considering its importance to the quality control of drug products. Therefore, this study aims to develop and validate analytical methods for the quantification of dapagliflozin in tablets and determination of its impurities profile. Methods for the determination of dapagliflozin by high performance liquid chromatography (HPLC) and capillary electrophoresis (EC) were developed. Both were validated according to the parameters of specificity, linearity, limits of detection and quantification, precision, accuracy and robustness, and presented satisfactory results as recommended in the official guides. The HPLC method showed advantages as low limits of detection and quantification of the active substance and fast analysis time. On the other hand, the CE method stands out by its low cost and production of organic waste. In addition, an ultra-performance liquid chromatography (UPLC) method for the simultaneous determination of dapagliflozin in the presence of three related impurities was developed and validated, following the same parameters previously mentioned. The method presented adequate results for the separation, detection and quantification of these substances in a short time of analysis, and met all the requirements of the analytical validation. The toxicity of impurities and the drug was evaluated in 3T3 cells, by MTT, Red Neutral (RN) tests, evaluation of mitochondrial membrane potential, measurement of intracellular reactive species and comet assay. The cytotoxicity results obtained indicated different levels of cytotoxicity of the impurities after 24 and 96 hours of exposure, in different concentrations. DNA damage was not observed in any of the concentrations tested.