Efeito da suplementação de vitamina D nas alterações histopatológicas do tecido esplênico de camundongos com lúpus induzido por pristano

Abstract

Lúpus eritematoso sistêmico (LES) é uma doença autoimune crônica de caráter inflamatório e de etiologia pouco conhecida, que acomete múltiplos órgãos e tecidos. Há produção de autoanticorpos contra antígenos do próprio organismo, tendo como consequência o depósito de imunocomplexos nos tecidos, ocasionando um processo inflamatório crônico, mediado por uma miríade de moléculas, entre elas o fator de transcrição NF-κB. O baço é um dos órgãos afetados no LES. Assim, algumas das manifestações esplênicas observadas nos pacientes são esplenomegalia e alterações histológicas do órgão. A proliferação de megacariócitos (MKs) no tecido esplênico é observada facilmente no baço de camundongos em modelos de LES. Um destes modelos é o de lúpus induzido por pristano (PIL). A vitamina D (vitD) vem sendo estudada por seu potencial imunomodulador, agindo tanto na imunidade inata quanto adaptativa. Neste trabalho, procurou-se identificar alterações histopatológicas no baço de camundongos PIL, além da esplenomegalia, assim como avaliar a expressão, neste tecido, de moléculas envolvidas na inflamação sistêmica causada pelo LES. Adicionalmente, buscou-se identificar possíveis efeitos moduladores da vitD sobre essas manifestações. Para isso, foram analisadas amostras de baço de 38 camundongos BALB/c fêmeas, divididos em três grupos: controle (CO), lúpus induzido por pristano (PIL) e PIL com suplementação de vitamina D (VD). Os baços foram pesados e foi calculada a proporção do peso do órgão sobre o peso do animal. As análises histológicas foram realizadas em lâminas de hematoxilina-eosina (H&E) e imunofluorescência (IF) dos baços. As lâminas de H&E foram analisadas para identificação das alterações histopatológicas e para a contagem de MKs. Esta contagem foi realizada em 10 campos aleatórios. Lâminas de IF foram marcadas com anticorpos anti-IgM, anti-IgG e anti-NF-κB. Os animais dos grupos PIL e VD desenvolveram esplenomegalia e apresentaram alterações histopatológicas como presença de células espumosas, desorganização das polpas vermelha e branca e expansão da cápsula fibrosa. Tanto PIL quanto VD tiveram aumento significativo no número de MKs por campo observado, comparados com o grupo CO. Não houve diferença significativa entre os grupos PIL e VD nessa contagem. Ademais, não foi observada diferença estatisticamente significativa na expressão de IgM, IgG e NF-κB entre os três grupos pesquisados. Deste modo, conclui-se que o modelo PIL desenvolve esplenomegalia e alterações histopatológicas com aumento da presença de MKs no baço dos animais induzidos. Ao mesmo tempo, não foram observados efeitos imunomoduladores da suplementação de vitD no tecido esplênico de camundongos PIL.

Systemic lupus erythematosus (SLE) is a chronic autoimmune disease with an inflammatory nature and an unknown etiology, affecting multiple organs and tissues. There is the production of autoantibodies against the body's own antigens, resulting in the deposition of immune complexes in tissues, causing a chronic inflammatory process mediated by a myriad of molecules, including the transcription factor NF-κB. Spleen is one of the organs affected in SLE. Thus, some of the splenic manifestations observed in patients include splenomegaly and histological alterations of the organ. The proliferation of megakaryocytes (MKs) in the splenic tissue is easily observed in the spleens of mice in SLE models. One of these models is pristane-induced lupus (PIL). Vitamin D (vitD) has been studied for its potential immunomodulatory effects, acting on both innate and adaptive immunity. In this study, we sought to identify histopathological changes in the spleens of PIL mice, as well as splenomegaly, and to evaluate the splenic expression of molecules involved in the systemic inflammation caused by SLE. Additionally, we aimed to identify possible modulatory effects of vitD on these manifestations. For this, spleen samples from 38 female BALB/c mice, divided into three groups – control (CO), pristane-induced lupus (PIL), and PIL with vitamin D supplementation (VD) –, were analyzed. Spleens were weighed, and the proportion of organ weight to animal weight was calculated. Histological analyses were performed on hematoxylin-eosin (H&E) and immunofluorescence (IF) slides of the spleens. The H&E slides were analyzed to identify histopathological changes and to count MKs. These counts were performed in 10 random fields. IF slides were labeled with anti-IgM, anti-IgG, and anti-NF-κB antibodies. Animals in the PIL and VD groups developed splenomegaly and exhibited histopathological changes such as the presence of foam cells, disorganization of red and white pulp, and expansion of the fibrous capsule. Both PIL and VD had a significant increase in the number of MKs per observed field compared to the CO group. There was no significant difference between the PIL and VD groups in these counts. Furthermore, no statistically significant difference was observed in the expression of IgM, IgG, and NF-κB among the three groups studied. Thus, we conclude that the PIL model develops splenomegaly and histopathological changes with an increased presence of MKs in the spleens of induced animals. Simultaneously, no immunomodulatory effects of vitD supplementation were observed in the splenic tissue of PIL mice.