Efeitos da adição de ácido fosfórico (H3PO4) no diluente de refrigeração de sêmen equino

Abstract

Equinos são selecionados por inúmeros fatores, entre eles desempenho esportivo, características fenotípicas ou genéticas, muitas vezes selecionando fatores indesejáveis para a reprodução. A inseminação artificial com sêmen refrigerado é umas das principais biotécnicas utilizadas na reprodução equina, porém existe uma grande variação na qualidade seminal utilizadas. O objetivo da presente pesquisa foi avaliar os efeitos da adição de ácido fosfórico (H3PO4) no diluente de refrigeração de sêmen equino. Foram realizados dois experimentos. No primeiro experimento, foi realizado uma análise de pH, com PHmetro de bancada com compensação de temperatura Kasvi®, comparando o leite desnatado UHT, com um diluente comercial (Botusemen®), após a adição de ácido fosfórico (H3PO4) nas concentrações de 0,015%, 0,03% e 0,06% em ambos os grupos. No segundo experimento, foram realizadas 12 coletas de seis garanhões férteis, da raça crioula. Os ejaculados foram divididos em quatro grupos, Grupo Controle, diluído somente com leite desnatado UHT, e três grupos com adição de ácido fosfórico (H3PO4) no leite UHT, nas concentrações de 0,015% (T1), 0,03% (T2) e 0,06% (T3). As análises foram realizadas às 3h, 24h e 48h após diluição, e incluíram avaliações dos padrões do CASA (Computer Assisted Sperm Analysis); teste de hiposmótico e análise morfológica de todos os quatro grupos. A comparação entre os diluentes demonstrou que o botusemen apresentou valores inferiores de pH de 5,48; 5,08; 4,6, comparado aos valores do leite desnatado UHT pH = 6,34; 6,33; 6,1. Houve uma redução significativa da motilidade total, motilidade progressiva, motilidade progressiva rápida, motilidade progressiva lenta, velocidade curvilinear, velocidade em linha reta, velocidade da trajetória média, frequência de batimento do flagelo e amplitude do deslocamento lateral de cabeça, no grupo T3 nos três diferentes tempos de análise, comparando com o Grupo Controle, T1 e T2. O Grupo T1 não apresentou diferenças em relação ao Grupo Controle em nenhum dos diferentes tempos de refrigeração estudados. Em conclusão a adição de ácido fosfórico (H3PO4) na concentração de 0,015% (T1), não foi deletéria para o sêmen equino, mais estudos são necessários para avaliação dos índices de fertilidade após a adição de ácido fosfórico.

Equines are selected based on numerous factors, including sports performance, phenotypic or genetic characteristics, often selecting undesirable factors for reproduction. Artificial insemination with cooled semen is one of the main biotechnologies used in equine reproduction, but there is great variation in the seminal quality used. The aim of this research was to evaluate the effects of adding phosphoric acid (H3PO4) to the cooling extender of equine semen. Two experiments were carried out. In the first experiment, a pH analysis was performed using a bench pH meter with Kasvi® temperature compensation, comparing UHT skim milk with a commercial extender (Botusemen®) after the addition of phosphoric acid (H3PO4) at concentrations of 0.015%, 0.03%, and 0.06% in both groups. In the second experiment, 12 collections were carried out from six fertile stallions of the Criollo breed. The ejaculates were divided into four groups: Control Group, diluted only with UHT skim milk, and three groups with the addition of phosphoric acid (H3PO4) in UHT milk at concentrations of 0.015% (T1), 0.03% (T2), and 0.06% (T3). Analyses were performed at 3h, 24h, and 48h after dilution and included assessments of CASA (Computer Assisted Sperm Analysis) parameters; hypoosmotic test and morphological analysis of all four groups. Comparison between extenders showed that Botusemen presented lower pH values of 5.48; 5.08; 4.6, compared to UHT skim milk values pH = 6.34; 6.33; 6.1. There was a significant reduction in total motility, progressive motility, rapid progressive motility, slow progressive motility, curvilinear velocity, straight line velocity, average path velocity, flagellar beat frequency, and amplitude of lateral head displacement in group T3 at the three different analysis times compared to the Control Group, T1, and T2. Group T1 showed no differences compared to the Control Group at any of the different cooling times studied. In conclusion, the addition of phosphoric acid (H3PO4) at a concentration of 0.015% (T1) was not detrimental to equine semen; further studies are needed to evaluate fertility rates after the addition of phosphoric acid.