Alterações genéticas relacionadas com a resistência à rifampicina em Mycobacterium tuberculosis

Abstract

A tuberculose, uma doença infecto-contagiosa causada pelo Mycobacterium tuberculosis, continua sendo um sério problema de saúde pública. O desenvolvimento de linhagens resistentes aos fármacos utilizados no tratamento da doença, agrava ainda mais essa situação. A resistência à rifampicina (RifR) está relacionada com mutações em uma região de 69 pares de base no gene rpoB. Neste trabalho foram analisados 132 isolados de M. tuberculosis obtidos em três estados do Brasil, dos quais 112 foram considerados resistentes à rifampicina. Foi seqüenciado um fragmento de 157-pb, que contém a região onde ocorrem a maioria das mutações, no gene rpoB. A substituição de uma base levando a troca do aminoácido ocorreu em 99 dos isolados RifR. Os aminoácidos mais freqüentemente substituídos estavam localizados nos códons 531, 526 e 516, com as freqüências de 56,3%, 23,2% e 6,3%, respectivamente. Também ocorrem substituição de duas bases no mesmo códon em 4 isolados RifR (3,5%). Mutações em códons separados ocorreram em 4 isolados (3,5%) e mutações associadas com deleção foram observadas em dois isolados. Neste estudo foram observadas 22 diferentes tipos de mutações, sendo que seis destas ainda não haviam sido descritas anteriormente. Em três isolados RifR não foram encontradas mutações na região analisada, sendo analisado uma região maior do gene. Não foi observada nenhuma mutação na região de 157-pb em 20 isolados sensíveis à rifampicina. Os resultados do seqüenciamento foram comparados com os resultados obtidos com um teste comercial- INNO LiPA Rif.TB. A eficiência do teste comercial em detectar as mutações relacionadas com a resistência à rifampicina foi de 91 %. Foram também analisados 55 isolados pela técnica de RFLP (restriction fragment length polymorphism). Estas análises revelaram que a resistência à múltiplos fármacos está relacionada com diversas linhagens de M. tuberculosis, e que apenas em alguns casos mutações específicas no gene rpoB estão relacionados com padrões específicos de RFLP.

Mutations in a 69-bp region of the rpoB gene in Mycobacterium tuberculosis are associated with rifampin resistance (RifR). We have studied 132 M. tuberculosis isolates from three States of Brazil, 112 of which were resistant to rifampin. A 157-bp fragment containing the 69-bp region of the ropB gene was analyzed. A single-base substitution occurred in 99 Rif isolates. The amino acids changes most frequently observed in point mutations were in codons 531, 526, and 516, with frequencies of 56,3%, 23,2%, and 6,3%, respectively. Double-base substitution (in the same codon) occurred in 4 RifR isolates (3,5% ). Mutation in two separate codons occurred 4 times (3,5% ), and mutations associated with deletion were found in 2 isolates. One isolate had 4 codons deletion. Twenty-two different kinds of mutations were identified in 112 Rif isolates, six of which had not been reported previously. We did not find any mutation in the 69- bp region of three RifR isolates. ln this isolates a large region was sequenced. We did not detect any mutation in the 157-bp region of twenty rifampin sensitive isolates. The sequencing results were compared with results from commercial kit - INNO LiPA Rif. TB. The efficiency of this test to detect mutations related with RifR was 91 % . We have also analyzed 55 of these isolates by restriction fragment length polymorphism (RFLP) based on IS6110. They revealed that in Brazil, multidrug resistant M. tuberculosis were comprised of a diverse set of strains, and that, in some cases, strains with certain rpoB mutations were associated with specific IS6110 RFLP profiles.