Verificação e adequação das metodologias de análise espectrofotométrica para a identificação de clorofila a em amostras de água

Abstract

Um convênio da Prefeitura Municipal de Porto Aleggre (DMAE - Departamento Municipal de Águas e Esgotos) com o Centro de Ecologia da Universidade Federal do Rio Grande do Sul foi firmado no sentido de adequar os métodos para a análise de clorofila a. Neste trabalho foram testados seis procedimentos, todos utilizando no mínimo 5 réplicas: 1. Concentração da amostra: foram usados 3 tipos diferentes de filtros: GF/C (1,20 μm) e GF/F (0,65 μm); Whatman (fibra de vidro) e Sartorius (0,45 μm) (acetato de celulose). 2. Relação entre volume filtrado e tempo de filtragem: foram testados dois volumes (300 ml e 500ml). 3. Tempo de estocagem do extrato: 6 e 24 horas. 4. Duração e rotação de centrifugação: 5, 10 e 15 minutos /3000 rpme 5000 rpm. 5. Alcalinização da acetona 90% com NH4OH. 6. Normalidade do HCL e tempo de acidificação para concentração da feofitina. Os resultados obtidos mostraram que o melhor filtro utilizado foi o de acetato de celulose (Sartorius), onde se observou o menor coeficiente de variação (5%) entre as cinco réplicas testadas. O filtro GF/F apesar de apresentar um coeficiente de variação alto (26%), mostrou-se mais rápido no tempo de filtragem, tendo sido então utilizado nas etapas posteriores. Em relação ao volume filtrado, 300 ml de amostra mostrou-se o mais adequado. Para o tempo de estocagem do extrato, obteve-se que tanto 6 horas como 24 horas podem ser utilizados. Para garantir baixa turbidez da amostra, deve-se utilizar uma rotação de centrífuga de 5000 rpm durante 10 minutos. A alcalinização de acetona como NH4OH mostrou-se um procedimento dispensável, já que não foi encontrada diferença significativa entre sua utilização ou não. A normalidade do ácido pode variar entre 0,5 e 4 N, desde que o tempo de degradação da clorofila se complete.

A cooperation project was made with Prefeitura Municipal de Porto Aleggre (DMAE - Departamento Municipal de Águas e Esgotos) and the Centro de Ecologia da Universidade Federal do Rio Grande do Sul to adequate analyses of Chlorophyll by standard methods. In this work six assays were tested. 1. Sample concentration: three different kinds of filter were used; GF/C (1,20 μm) and GF/F (0,65 μm) Whatman (glass fibre) and Sartorius (0,45 μm) (celullose acetate). 2. Relation with filtrate volume and filtration time: two volumes were tested (300 ml and 500 ml). 3. Time of extract store: 6 and 24 hours. 4. Time and centrifugue rotation: 5, 10 and 15 minutes/3000 and 5000 rpm. 5. Acetone 90% with addition of NH4OH. 6. HCL normality and time acidification to obtain phaeophytin. The results showed that the best filter was the celulose acetate (Sartorius), which presented less variation coefficient (5%) between the five tested replies. The GF/F filter, despite a great variation coefficient (26%), show a fast filtration time and for this reason was used in the posterior stages. A sample volume of 300 ml showed as more adequated. About the time of extract stored, both 6 and 24 hours could be used. To obtain a small sample turbidity it should be used a 5000 rpm rotation during 10 minutes. The results with the addition of NH4OH to acetone showed no significative results and this practice could be dispensable. The acid normality could variate between 0,5 and 4 N.