Caracterização fenotípica e genotípica de diferentes sorovares de Salmonella, associados com lesão em frango de corte ao abate

Abstract

A avicultura industrial representa um importante papel na economia brasileira e mundial. Com o avanço da avicultura tem-se um aumento da densidade populacional, dificultando o controle de agentes patogênicos de importância como a Salmonella spp. especialmente aquelas de interesse de saúde pública e também de importância econômica devido aos prejuízos causados aos plantéis avícolas. O objetivo deste trabalho foi realizar a caracterização fenotípica e genotípica de 22 cepas de Salmonella spp. pertencentes a diferentes sorovares e isoladas de lesões compatíveis com às descritas para o gênero em frangos de corte ao abate No primeiro experimento, foi realizada a avaliação da capacidade de produção de biofilme em placas de poliestireno submetidas a temperaturas de incubação de 4ºC, 12ºC, 25ºC e 37ºC, a fim de simular as variações de temperatura que os produtos de origem animal sofrem do campo até o consumidor. No segundo experimento, determinou-se o perfil de resistência aos antimicrobianos dessas mesmas cepas através do método de disco-difusão em ágar frente a quatorze antimicrobianos. No terceiro experimento, foi realizada a pesquisa de oito genes associados à virulência e três genes associados à formação de biofilme através da técnica de PCR para a caracterização molecular. No quarto experimento avaliou-se a similaridade genética pela técnica de PFGE e no quinto experimento realizou-se a ribotipificação através de PCR, sendo que cepas representativas dos ribotipos foram selecionadas para o sequenciamento. Entre os isolados analisados observou-se maior adesão de biofilme na temperatura de 12ºC, onde 77,3% das cepas formaram biofilme. Esta temperatura é um ponto crítico na conservação dos alimentos, uma vez que é a temperatura encontrada nas salas de corte dos frigoríficos. As maiores resistências antimicrobianas, independentemente do sorovar, foram para ciprofloxacina, estreptomicina e tiamulina; nenhum antimicrobiano conseguiu inibir 100% dos isolados analisados. Entre os isolados avaliados 63,64% foram classificados como multirresistentes e foram encontrados 12 perfis de suscetibilidade aos antimicrobianos. Todos os genes associados à virulência e à formação de biofilme foram detectados em pelo menos um isolado independente do sorovar. Observou em 100% dos isolados os genes lpfA e adrA. Através da PFGE observou similaridade genética superior a 90% para todos os isolados, independente do sorovar. A análise das cepas pela ribotipificação por PCR classificou todas as cepas no ribotipos R5 e o sequenciamento de DNA demonstrou a confirmação da similaridade genética dos clones. Esses resultados demonstram uma mesma origem clonal. Foi possível realizar a caracterização fenotípica e genotípica dos isolados de Salmonella spp. e os resultados são relevantes nos quesitos de saúde pública e econômica devido aos prejuízos causados aos plantéis avícolas.

Industrial poultry farming represents an important role in Brazilian and world economy. With the advancement of poultry farming, there has been an increase in population density making it difficult to control important pathogens such as Salmonella spp., especially those of public health interest and of economic importance due to the damage caused to poultry flocks. The purpose of this work was to carry out the phenotypic and genotypic characterization of 22 strains of Salmonella spp. belonging to different serovars and isolated from lesions compatible with those described for the genus in broilers for slaughter. In the first experiment, the evaluation of the biofilm production capacity in polystyrene plates submitted to incubation temperatures of 4 ºC, 12 ºC, 25 ºC, and 37 ºC was performed in order to simulate the temperature variations that animal products suffer from the field to the end consumer. In the second experiment, the antimicrobial resistance profile of these same strains was determined using the disk-diffusion method in agar against fourteen antimicrobials. In the third experiment, eight genes associated with virulence and three genes associated with biofilm formation were investigated through PCR for molecular characterization. Still, in the fourth experiment, the genetic similarity was evaluated by the PFGE technique and in the fifth experiment ribotyping was performed through PCR, where representative strains of the ribotypes were selected for sequencing. Among the isolates analyzed, greater biofilm adhesion was observed at a temperature of 12 ºC, where 77.3% of the strains adhered at a temperature of 12 ºC, which is considered a critical point in food preservation, as this temperature is found in the refrigerated slaughter rooms. The highest antimicrobial resistances, regardless of the serovar, were for ciprofloxacin, streptomycin and tiamulin; no antimicrobial was able to inhibit 100% of the analyzed isolates. Among the isolates evaluated, 63.64% were classified as multiresistant and 12 antimicrobial susceptibility profiles were found. All genes associated with virulence and biofilm formation were detected in at least one serovar-independent isolate. It was observed lpfA, adrA genes in 100% of the isolates. Through PFGE, a genetic similarity greater than 90% was observed for all isolates, regardless of the serovar, indicating that these strains have the same clonal origin. The analysis of the strains by ribotyping by PCR were classified in 100% in the R5 ribotypes, indicating that they have the same clone. DNA sequencing confirmed the genetic similarity of the clones. With these results we can observe that regardless of the studied serovar, the strains have the same origin being related to the poultry environment. It was possible to perform the phenotypic and genotypic characterization of the Salmonella spp. and the results are relevant in terms of public and economic health due to the damage caused to poultry flocks.