Detecção, caracterização e epidemiologia da virose do endurecimento dos frutos causada por Cowpea Aphid-Borne Mosaic Virus em Maracujazeiro-Azedo

Abstract

O Brasil é o maior produtor e consumidor mundial de maracujá com uma produção de aproximadamente 555.000 toneladas por ano. A produtividade está limitada por fatores de natureza fitossanitária, principalmente os vírus. O endurecimento dos frutos do maracujazeiro (EFM) é a principal virose da cultura, que no Brasil é causada por Cowpea aphid-borne mosaic virus (CABMV), Potyvirus transmitido de maneira não-persistente por afídeos. O CABMV foi relatado em Santa Catarina (SC) em 2008 e no Rio Grande do Sul (RS) em 2016. Neste estudo, foi desenvolvido e validado um protocolo de RT-PCR em tempo real para a detecção do CABMV, determinada a incidência do vírus em diferentes pomares do RS e de SC, realizada a caracterização molecular dos isolados virais e também realizado um ensaio de transmissibilidade do vírus por sementes. Apesar da variabilidade existente, foi possível desenhar iniciadores e sonda TaqMan específicos para o CABMV e um protocolo direto de preparação de amostras e de amplificação por RT-PCR em tempo real. Este protocolo foi comparado com a técnica PTA-ELISA e demonstrou-se 100 vezes mais sensível. O aumento da incidência do vírus foi menor em pomares onde a infecção foi detectada mais tardiamente. Os isolados de CABMV do RS foram agrupados em um cluster monofilético com valor de 78% de bootstrap e apresentaram menor distância em relação aos isolados Fernao-SP e CABMV-SP. No ensaio de transmissibilidade do vírus por sementes não se pôde evidenciar a transmissão, embora tenha se constatado que o vírus está presente na semente. Os resultados deste trabalho são importantes para o desenvolvimento de estratégias de manejo e redução de perdas causadas pelo CABMV.

Brazil is the world's largest producer and consumer of passion fruit with a production of approximately 555,000 tons per year. Productivity is limited by phytosanitary factors, especially viruses. The Passion fruit Woodiness Disease (PWD) is the main viral disease of the crop and in Brazil is caused by Cowpea aphid-borne mosaic virus (CABMV), Potyvirus that is transmitted nonpersistently by aphids. The CABMV was reported in Santa Catarina (SC) in 2008 and in Rio Grande do Sul (RS) states in 2016. In this study, a real-time RT-PCR protocol for the detection of the CABMV was developed and validated, virus incidence was determined in different orchards in SC and RS, molecular characterization of virus isolates and virus transmissibility by seed assays were performed. In spite of the existing variability, it was possible to design specific TaqMan primers and probe for the CABMV and a direct protocol of sample preparation and real-time RT-PCR amplification. This protocol was compared with the PTA-ELISA technique and proved to be 100 times more sensitive. The increase in virus incidence was lower in orchards where the infection was detected later. CABMV isolates were grouped in a monophyletic cluster with a 78% bootstrap value and were closer than the Fernao-SP and CABMV-SP isolates. In the test of virus transmissibility by seed, transmission can not be evidenced, although the virus is present in the seed. The results of this work are important for the development of management strategies and reduction of losses caused by the CABMV.