Avaliação do biofilme de staphyloccocus epidermidis detectado in vitro através de diferentes fluoróforos

Abstract

O causador da doença endodôntica é o biofilme. Além disso, o Staphylococcus epidermidis é uma das espécies bacterianas mais prevalentes em casos de reinfeções póstratamento endodôntico A fluorescência é uma abordagem de diagnóstico inovadora e de grande relevância para a detecção de biofilmes bacterianos, este meio pode ser utilizado para ajudar na diferenciação de tecidos saudáveis de contaminados. Nesse sentido, este trabalho tem como objetivo avaliar o efeito da aplicação de fluoróforos na visualização do biofilme endodôntico de S. epidermidis em dentes bovinos, através de um estudo experimental laboratorial realizado em quarenta e cinco (45) dentes unirradiculares. Os dentes foram contaminados com a cepa S. epidermidis por 48 horas, após os dentes foram divididos aleatoriamente em 5 grupos de tratamento: Controle Negativo; Controle Positivo; 5-ALA, Qubit e Calceína. As amostras foram analisadas por meio do Reveal FGS (ReVeal, Designs for Vision, New York, USA) e classificadas em sim/não para fluorescência e espalhamento de imagem. Também, as amostras foram submetidas à Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV) e à Contagem das Unidades Formadoras de Colônias (UFC) as quais foram analisados estatisticamente através dos testes Kruskal Wallis, Mann-Whitney e ANOVA com post hoc de Tukey com P<0.05. Os resultados comprovaram que a Calceína, o Qubit e o 5-ALA mostraram-se bons fluoróforos para visualização clínica do biofilme de S. epidermidis combinado à luz UV. O 5-ALA foi considerado o melhor fluoróforo testado, pois além de apresentar fluorescência uniforme sem espalhamento de imagem, mostrou também propriedades antimicrobianas frente ao biofilme de S. epidermidis.

Biofilm is the main mediator of endodontic disease, and Staphylococcus epidermidis is one of the most prevalent bacterial species in cases of endodontic treatment failure. Fluorescence is an innovative and relevant diagnostic approach for the detection of bacterial biofilms, as it can help to differentiate healthy from contaminated tissues. The aim of this study was to evaluate the effect of different fluorophores on the visualization of S. epidermidis endodontic biofilm in bovine teeth. Forty-five (45) single-rooted teeth were contaminated with S. epidermidis for 48 hours, and then randomly assigned to 5 treatment groups: Negative Control, Positive Control, 5-ALA, Qubit and Calcein. Samples were clinically analyzed using Reveal FGS (ReVeal, Designs for Vision, New York, USA) and categorized as positive or negative for fluorescence and image scattering. Samples were also subjected to scanning electron microscopy (SEM) and colony-forming units (CFU) counting, which were statistically analyzed using Kruskal Wallis, MannWhitney, and ANOVA with Tukey post hoc (P<0.05) tests. Results showed that Calcein, Qubit, and 5-ALA were effective fluorophores for clinical visualization of S. epidermidis biofilm under UV light. However, 5-ALA was found to be the best fluorophore tested, as it showed a uniform fluorescence without image scattering, as well as antimicrobial properties against S. epidermidis biofilm.