Caracterização de duas diferentes subunidades do antígeno B de Echinococcus granulosus e avaliação sorológica de antígenos recombinantes

Abstract

Duas diferentes subunidades (AgB8/1 e AgB8/2) do antígeno B de Echinococcus granulosus foram caracterizadas e a estrutura dos genes que codificam essas proteínas foram comparadas. As seqüências de DNA foram expressas em Escherichia coli e o valor diagnóstico dos antígenos foi determinado. A seqüência genômica do AgB8/1 apresenta um íntron de 92 pb na posição correspondente ao aminoácido 16 e a seqüência genômica do AgB8/2 apresenta um íntron de 68 pb na posição correspondente ao aminoácido 20. Ambos os íntrons estão localizados entre a porção N-terminal hidrofóbica e a proteína secretada. O potencial diagnóstico dos antígenos recombinantes AgB8/1, AgB8/2, Ag4, Ag5, Ag8t e Ag8c foi testado em ELISA frente a uma soroteca de 211 soros. O antígeno recombinante AgB8/2 mostrou uma sensibilidade média de 86,95% e uma especificidade de 96,72% em ELISA, apresentando portanto, uma melhor performance para diagnóstico da hidatidose cística do que os demais recombinantes testados no presente trabalho. Entre os antígenos recombinantes testados o AgB8/1 e o AgB8/2 não apresentaram reações cruzadas com soros de pacientes com cisticercose e o recombinante AgB8/2 mostrou ser espécie-específico com o painel de soros utilizado. Testes com o peptídeo sintético GU4 mostraram sua mais baixa performance diagnóstica em ELISA, quando comparada com o antígeno recombinante AgB8/2 cuja porção e-terminal ele mimetiza.

Two different Echinococcus granulosus antigen B subunits (AgB8/1 and AgB8/2) were characterized and the structure of the genes encoding these two proteins were compared. DNA sequences were expressed in Echerichia coli and the antigens diagnostic value was then assessed. The genomic sequences of AgB8/1 has a 92 bp intron in the position corresponding to amino acid 16; the AgB8/2 genomic sequence presents a 68 bp intron in the position corresponding to amino acid 20. Either introns is located between the putative N-terminal hydrophobic sequence and the secreted protein. The diagnostic performance of the recombinants AgB8/1, AgB8/2, Ag4, Ag5, Ag8t and Ag8c was tested in ELISA with 211 sera. The recombinant antigen AgB8/2 showed a sensitivity of 86,95% and a specificity of 96,72% in ELISA, showing the best diagnostic performance in ELISA among all recombinants tested in this work. The two recombinant antigens (AgB8/1 and AgB8/2) did not show cross-reaction with cysticercosis patient sera and the recombinant AgB8/2 was species-specific. The GU4 synthetic peptide showed lower diagnostic performance than the recombinant AgB8/2 which e-terminal portion it mimics.