Desenvolvimento de metodologia analítica para detecção de diuréticos em suplementos alimentares à base de proteína de soro de leite (whey-protein)

Abstract

Suplementos alimentares à base de proteína do soro de leite (PSM) do tipo Whey-Protein (WP) são amplamente utilizados por atletas profissionais. Entretanto, há relatos na literatura de atletas que usaram estes produtos e testaram positivo no exame antidoping, levantando a suspeita de que tais produtos contenham substâncias consideradas como doping. A presença de diuréticos como Clorotiazida, Hidroclorotiazida, Furosemida, Amilorida e Clortalidona em quaisquer quantidades, em amostras de urina e sangue é caracterizada como doping e pode implicar em penalidade ao atleta, independente da intencionalidade ou não do uso. Assim, o objetivo desse trabalho foi desenvolver um método confiável por cromatografia líquida de alta eficiência com detector UV (CLAE-UV) para pesquisa de diuréticos em PSM. O método foi desenvolvido e validado quanto aos parâmetros de especificidade, linearidade, precisão, exatidão, robustez, efeito matriz, limite de detecção e de quantificação. Foi utilizada a coluna C8 Phenomenex, fase móvel, composta por tampão acetato de amônio 100 mM, pH 4,5 e acetonitrila em um sistema gradiente e a detecção foi realizada em 276 nm. O método foi testado através da análise de 21 amostras de PSM comerciais obtidas na região metropolitana de Porto Alegre. Sendo que, das amostras analisadas, 42,89 % tiveram resultado positivo para pelo menos um dos diuréticos pesquisados. Uma amostra apresentou resultados positivo para três diuréticos analisados. Diante dos resultados ressalta-se a importância da pesquisa de adulterantes nas amostras de PSM para o adequado controle de qualidade desses produtos e maior segurança para os consumidores.

Food supplements based on isolated milk proteins known as Whey Protein Concentrate (WPC) are widely used by professional athletes. Nonetheless, there are reports in the literature of athletes who used these products and tested positive in the anti-doping test causing suspicion that such products contain substances considered to be doping. The presence of diuretics such as Chlorothiazide, Hydrochlorothiazide, Furosemide, Amiloride, and Chlorthalidone in any quantities in urine and blood samples is characterized as doping and may result in a penalty for the athlete, whether intentional used or not. Thus, the objective of this work was to develop a reliable method by high-performance liquid chromatography coupled to a UV detector (HPLC-UV) to investigate the presence of diuretics in WP. The method was developed and validated for specificity, linearity, precision, accuracy, robustness, matrix effect, detection, and quantification limits. It was used a Phenomenex C8 column, mobile phase composed of 100 mM ammonium acetate buffer pH 4.5, and acetonitrile in a gradient system; detection was performed at 276 nm. The method was tested by analyzing 21 samples of commercial WP obtained from the metropolitan region of Porto Alegre. Regarding the analyzed samples, 42,89% showed positive results for at least one of the researched diuretics. One sample tested positive for three different diuretics. Thereby, the results highlighted the importance of researching adulterants in WP samples to assure proper control's quality of these products and greater safety for consumers.