Influência do tratamento com imatinibe sobre a sinalização purinérgica em linhagem celular de leucemia mielóide crônica

Abstract

A leucemia Mielóide Crônica (LMC) é caracterizada, na ampla maioria dos casos, pela translocação entre os cromossomos 9 e 22 t (9:22) (q34;11). Essa fusão resulta na produção de uma oncoproteína denominada BCR-ABL (Ph+). O imatinibe é o fármaco de primeira escolha no tratamento da LMC, atuando como inibidor seletivo da BCR-ABL-tirosino-quinase, através da competição pelo sítio ativo do ATP. A sinalização purinérgica, já descrita por seu papel relacionado a neoplasias malignas, está envolvida na modulação de nucleotídeos como o ATP, ADP e AMP, através da ação sequencial de enzimas como as NTPDases e ecto-5’-nucleotidase (CD73). Sendo assim, o objetivo desse trabalho foi caracterizar a expressão e a funcionalidade de componentes do sistema purinérgico, em linhagem celular K-562 (Ph+) e em uma fração celular linfomononuclear controle, após tratamento com imatinibe. Métodos: A expressão das enzimas da família das NTPDases e ecto-5’-nucleotidase foi avaliada em linhagem K-562 (Ph+), através da técnica de RT-PCR, antes e após 24 e 48 horas de tratamento com imatinibe. Como controle não tumoral foi utilizada uma fração linfomononuclear periférica de indivíduos sadios. A atividade de hidrólise dos nucleotídeos (ATP, ADP, UDP e AMP) foi determinada utilizando o método colorimétrico baseado na liberação de fosfato inorgânico. Resultados: Os resultados obtidos demonstram um aumento significativo na atividade de hidrólise dos nucleotídeos testados na linhagem K-562 (Ph+), quando comparada com a fração linfomononuclear, principalmente após 24h de tratamento. Corroborando com estes dados, a expressão das NTPDases 2, 3, 5 e 6 foi superior em células K-562 (Ph+), em comparação à fração linfomononuclear, podendo justificar a maior atividade de hidrólise encontrada nesta linhagem. Conclusão: Os resultados obtidos demonstram que a linhagem K-562 (Ph+) expressa as NTPDases 1, 2, 3, 5, 6 e a ecto-5’nucleotidase (CD73), responsáveis pela modulação dos níveis de nucleotídeos extracelulares e apresentam diferença na expressão em relação as células linfomononucleares. Além disso, após tratamento com imatinibe, houve aumento tanto da expressão como na atividade de hidrólise dos nucleotídeos indicando um possível efeito de ativação destas enzimas em resposta ao ATP acumulado que é deslocado por este fármaco.