Refinamento da avaliação de morfologia espermática em sêmen criopreservado de Rhamdia quelen

Abstract

A avaliação de morfologia espermática de peixes é uma técnica que visa analisar as quantidades de anormalidades dos espermatozoides presentes no sêmen de um reprodutor. No qual, quando presente em grandes quantidades, as anormalidades espermáticas provocam a diminuição da motilidade, o que explica as falhas reprodutivas de machos classificados como aptos à reprodução. Além disso, a avaliação das características espermáticas é imprescindível na rotina de reprodução artificial em qualquer espécie. Porém, as referências autorais da quantidade de células espermáticas a serem avaliadas para a análise de validação espermáticas pelo método de morfologia espermática, divergem entre autores e em trabalhos de mesma autoria. Portanto, este trabalho tem como objetivo validar se as quantidades totais de células espermáticas avaliadas pelos autores são válidas. Neste trabalho foi analisado células espermáticas de jundiá (Rhamdia quelen) que passaram pelo processo de criopreservação, pois as baixas temperaturas causam injúrias nos espermatozoides, aumentando a quantidade de anormalidades espermáticas a serem encontradas. Para a criopreservação foram utilizadas palhetas (0,25 mL) na proporção de 1:3 (62,5 μL sêmen e 187,5 μL meio de congelamento) com o meio de congelamento contendo 5% D-frutose, 5% leite em pó e 10% Metanol. As amostras foram congeladas em dry-shipper durante 18 horas e então passadas para um botijão de nitrogênio líquido onde permaneceram por 6 meses. As amostras foram descongeladas em banho maria por 10 segundos em 25°C e então diluídas em 1000 μL de solução extensora de NaCl (325 mOsm kg -1; pH 7,6; 24 ◦C; diluído em água destilada). Imediatamente após a diluição na solução extensora, foi separado uma alíquota de 1μL de sêmen criopreservado de cada macho e fixado em formol-salino-tamponado. As amostras foram coradas com Rosa de Bengala a 4%. Para a contagem de células espermáticas totais, foram escolhidos cinco tratamentos (100, 200, 400, 800 e 1600 espermatozoides avaliados) com cinco machos, sendo cada macho uma repetição, onde foram avaliado em duplicata. Não houve diferença estatística de uma maneira geral das células avaliadas. Porém, quanto maior o número de células avaliadas, menor foi a variação dos resultados. Indicando assim, que quanto mais células espermáticas um pesquisador analisar, mais preciso será seu resultado.

The evaluation of fish sperm morphology is a technique that aims to analyze the amounts of sperm abnormalities present in the semen of a breeder. In which, when present in large quantities, sperm abnormalities cause a decrease in motility, which explains the reproductive failures of males classified as suitable for reproduction. In addition, the evaluation of spermatic characteristics is essential in the routine of artificial reproduction in any species. However, the authorial references of the number of sperm cells to be counted for the seminal validation analysis by the sperm morphology method, differ between authors and in studies by the same authorship. Therefore, this study aims to validate whether the total amounts of sperm cells counted by the authors are valid. In this study were analyzed sperm cells of silver catfish (Rhamdia quelen) that went through the cryopreservation process, because the low temperatures cause injuries to the sperm, increasing the amount of sperm abnormalities to be found. For cryopreservation, straws (0,25 mL) were used in a 1:3 ratio (62.5 μL semen and 187.5 μL freezing medium) with the freezing medium containing 5% D-fructose, 5% powdered milk and 10% methanol. The samples were frozen in a dry-shipper for 18 hours and then transferred to a liquid nitrogen cylinder where they remained for 6 months. The samples were thawed in a water bath for 10 seconds at 25°C and then diluted in 1000 μL of NaCl (325 mOsm kg-1; pH 7.6; 24 ◦C, diluted in distilled water) extender solution. Immediately after dilution in the extender solution, an aliquot of 1μL of the thawed semen was separated from each male and fixed in buffered saline-formaldehyde. Samples were stained with 4% Rose Bengal. For the total sperm cell count, five treatments were chosen (100, 200, 400, 800 and 1600 evaluated spermatozoa) with five males, each male being one repetition, where were evaluated in duplicate . There was no statistical difference in general of the cells counted. However, the greater the number of cells evaluated, the smaller the variation in the results. Thus indicating that the more sperm cells a researcher analyses, the more accurate his result will be.