Efeito antineoplásico do fingolimode em culturas de linhagens celulares de meduloblastoma humano

Abstract

Os tumores do sistema nervoso central estão associados a uma elevada taxa de morbidade e mortalidade, sendo que os meduloblastomas representam um grupo heterogêneo de tumores primários malignos, com características agressivas e tendência à formação de metástases. A terapia vigente para tratamento de meduloblastomas envolve, cirurgia, radioterapia e quimioterapia adjuvante. A terapêutica deste tumor é direcionada à minimização dos efeitos adversos a longo prazo, bem como uma maior efetividade dos fármacos antineoplásicos. Os inibidores da histona desacetilase (iHDAC) são agentes epigenéticos que exibem atividades antitumorais em modelos experimentais para estudo meduloblastoma. O fingolimode (FTY720), um agente imunossupressor, atualmente utilizado no tratamento da esclerose múltipla, também pode ter atividade antineoplásica e atuar como iHDAC. O objetivo de nosso trabalho foi analisar a ação antineoplásica do fingolimode em culturas de meduloblastoma humano (linhagens celulares D283 e DAOY), bem como sua ação epigenética. As células em estudo foram tratadas com diferentes concentrações de fingolimode (5, 7.5 ou 10 Μm). A viabilidade celular foi analisada por meio de contagem celular através de um hemocitômetro e a sobrevivência celular por análise de formação de colônias. Ação epigenética do fingolimod foi estudada mediante acetilação da histona H3 medida por método de ELISA. Assim, foi observado que o fingolimode nas concentrações de 7,5 ou 10 μM, foram capazes de induzir uma redução significativa na viabilidade celular em culturas de meduloblastomas de ambas linhagens celulares, sendo que resultados semelhantes foram observados para a inibição da sobrevivência celular. Em ambas as linhagens celulares, o fingolimode também levou a um aumento significativo nos níveis de acetilação de histonas H3. Nossos resultados fornecem evidências indicando que o fingolimode apresenta atividades antineoplásica por provável mecanismos epigenético.

Central nervous system (CNS) tumors are associated with a high morbidity and mortality rate, and Medulloblastoma (MB) represents a heterogeneous group of malignant primary tumors, with aggressive characteristics and tendency to metastasis. Current therapy for treatment of medulloblastomas involves surgery, radiotherapy, and adjuvant chemotherapy. MB therapy has been directed to the minimization of long-term adverse effects, as well as to a greater effectiveness of new drugs directed to this extremely aggressive oncology pathology. Histone deacetylase inhibitors (HDACis) are epigenetic agents that exhibit antitumor activities in experimental medulloblastoma (MB). Fingolimod (FTY720), an immunosuppressive agent currently used in the treatment of multiple sclerosis, also has anticancer actions and can act as HDACi. Here we examine whether fingolimod can inhibit the viability and survival of human MB cells, and whether the effects are accompanied by increased histone acetylation. In these study, D283 and DAOY MB cells were treated with different doses of fingolimod and their cell viability was evaluated by counting cells in a hemocytometer and cell survival was analyzed by colony formation assay. Histone H3 acetylation was measured with an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Thus, fingolimod at a dose of 7.5 or 10 μM was able to induce a significant reduction in cell viability in D283 and DAOY cultures, and similar results were observed for inhibition of cell survival. In both cell lines, fingolimod also led to a significant increase in acetylated H 3 levels. These results provide early evidence indicating that fingolimod induces antitumor activities in MB through an epigenetic mechanism in an increase in histone H3 acetylation is observed.