Avaliação do potencial de formação de biofilme por espécies de Listeria sp. isoladas de amostras de alimentos

Abstract

Nas indústrias de alimentos, a formação de biofilmes resulta em graves problemas. Portanto, o estudo objetivou a identificação de em nível de espécie de 12 isolados de alimentos, fatiados e superfícies de manipulação de alimentos em Laboratórios de Fiambreria. Avaliação da susceptibilidade a antimicrobianos e analisar a formação de biofilme por Listeria monocytogenes em diferentes tempos, temperatura, superfície e matriz alimentar, bem como o cultivo de mono-espécie e associado com Pseudomonas fluorescens, assim como avaliação da eficiência de sanitizantes na erradicação de biofilmes. A identificação foi através da técnica de MALDI-TOF/MS, a susceptibilidade a antimicrobianos foi pelo método Kirby-Bauer. A avaliação da capacidade de formação de biofilme in vitro foi em microplaca, o modelo experimental foi baseado na formação de biofilmes de L. monocytogenes em cupons de aço inox e polipropileno. Os cupons foram imersos e mantidos em temperaturas de 37ºC nos tempos de 24,48,72 horas em Caldo triptona de soja, acrescido de 0.6 % extrato de levedura (TSBYE) e em matriz alimentar leite integral UHT nas temperaturas de 37ºC, temperatura ambiente nos tempos de 24,48 e 72 horas e em refrigeração em tempos de 72,120 e 168 horas. O cultivo associado de L. monocytogenes com P. fluorescens foi em cupons de aço inox e polipropileno com leite integral UHT em temperatura ambiente e refrigeração. Foram identificadas três espécies, sendo, L. monocytogenes, L. innocua e L. seeligeri. Na avaliando a susceptibilidade a antimicrobianos 66,6% foi resistência a pelo menos um dos discos testado. Na análise da formação de biofilme em microplaca verificou-se que três espécies de L. monocytogenes, provaram ser forte formador de biofilme. Na avaliação da formação de biofilme de L. monocytogenes em cupons de aço inox, a população de células sésseis variou entre 4,29 e 5,41 log10 UFC/cm2 e em polipropileno entre 6,21 e 7,03 log10 UFC/cm2 no TSBYE. Também observados adesão celular em matriz alimentar leite integral UHT em cultivo de mono-espécie e cultivo associado de L. monocytogenes com P. fluorescens. Na análise dos sanitizantes o ácido peracético e hipoclorito de sódio demonstram eficiência na erradicação de células sésseis em cupons de aço inox. Portanto, os isolados de Listeria sp. mostraram-se como persistentes, formadores de biofilme e resistente a clindamicina e a sulfazotrim podendo representar risco para os consumidores.

In the food industries, the formation of biofilms results in serious problems. Therefore, the study aimed to identify the species-level identification of 12 food isolates, sliced and food handling surfaces in ham labs. Evaluation of antimicrobial susceptibility and analysis of biofilm formation by Listeria monocytogenes at different times, temperature, surface and food matrix, as well as mono-species cultivation and associated with Pseudomonas fluorescens, as well as evaluation of the efficiency of sanitizers in eradicating biofilms. The identification was through the MALDI-TOF/MS technique, the susceptibility to antimicrobials was through the Kirby-Bauer method. The in vitro biofilm formation capacity was evaluated on a microplate; the experimental model was based on the formation of L. monocytogenes biofilms on stainless steel and polypropylene coupons. The coupons were immersed and kept at temperatures of 37º C for 24, 48, 72 hours in tryptone soy broth, plus 0.6% yeast extract (TSBYE) and in UHT whole milk food matrix at temperatures of 37º C, room temperature in times of 24,48 and 72 hours and in refrigeration times of 72,120 and 168 hours. The associated cultivation of L. monocytogenes with P. fluorescens was in stainless steel and polypropylene coupons with UHT whole milk at room temperature and refrigeration. Three species were identified, namely, L. monocytogenes, L. innocua and L. seeligeri. In evaluating the antimicrobial susceptibility, 66.6% was resistance to at least one of the discs tested. In the analysis of biofilm formation on microplate it was found that three species of L. monocytogenes proved to be strong biofilm former. In evaluating the biofilm formation of L. monocytogenes in stainless steel coupons, the sessile cell population ranged between 4.29 and 5.41 log10 CFU/cm2 and in polypropylene between 6.21 and 7.03 log10 CFU/cm2 in the TSBYE. Cell adhesion in UHT whole milk food matrix was also observed in mono-species cultivation and associated cultivation of L. monocytogenes with P. fluorescens. In the analysis of sanitizers, peracetic acid and sodium hypochlorite demonstrate efficiency in the eradication of sessile cells in stainless steel coupons. Therefore, Listeria sp. they were shown to be persistent, biofilm formers and resistant to clindamycin and sulfazotrim, which may represent a risk to consumers.