Soluções aditivas para armazenamento de concentrado de plaquetas canino: avaliação de parâmetros bioquímicos

Abstract

A prática da transfusão sanguínea teve início no século passado na medicina humana, e vem evoluindo desde então. A pesquisa nesta área é essencial para a melhor capacitação de médicos veterinários e para garantir a qualidade e a rapidez do atendimento dos animais que necessitam de transfusão. O curto tempo de armazenamento limita a quantidade de concentrados de plaquetas (CP) que podem ser efetivamente utilizados nos centros de hemoterapia, o que resulta em muitas unidades sendo descartadas, com consequente geração de despesas e necessidade de busca de novos doadores para atender a contínua demanda por este hemocomponente. O desenvolvimento de meios e soluções de preservação de plaquetas possibilita o armazenamento de CP por tempo prolongado e são capazes de diminuir ou evitar os efeitos prejudiciais durante o seu armazenamento, chamados de lesão plaquetária de estoque, para que, ao final, se obtenha um CP de melhor qualidade para ser transfundido. O presente trabalho teve como objetivos avaliar o CP canino armazenado com diferentes soluções aditivas plaquetárias sintéticas (SAP) durante 13 dias, e comparar as soluções aditivas com base no metabolismo plaquetário in vitro. Neste estudo foram utilizadas 40 unidades de CP canino, obtidos através do método de plasma rico em plaquetas, conservadas nas soluções aditivas a seguir: Grupo controle (100% plasma; n= 13), Grupo SSP+ (n= 13) e Grupo Composol (n= 14). . Os parâmetros avaliados nos dias 1, 5, 9 e 13 incluíram: ATP, lactato, glicose, lactato desidrogenase (LDH), pH, sódio, potássio, bicarbonato, pO2, pCO2, swirling, contagem de plaquetas, leucócitos residuais, agregação plaquetária, cultura bacteriana, marcação com anticorpos monoclonais CD61 e CD62P (p selectina), exposição da fosfatidilserina (PS) (Anexina V) e viabilidade mitocondrial (ΔΨm) (sondas JC-1 e Mitotracker Red e Green). Durante o tempo de armazenamento foi observado comportamento metabólico semelhante ao relatado em trabalhos com plaquetas humanas. Houve redução de ATP, pCO2, pH, ΔΨm (JC-1 agregado e Mitotracker Red), bicarbonato e glicose; e aumento marcação de CD62-P, Mitotracker Green e JC-1 monômero, aumento de pO2, LDH, PDW e lactato. Ao comparar as SAP com os CP 100% plasma houve diferença significativa nos seguintes parâmetros: swirling, PDW, CD62-P, glicose, lactato, pH, pO2, pCO2, bicarbonato, PS e em ambas técnicas de avaliação de ΔΨm. De forma geral pode-se afirmar que o grupo 100% plasma manteve os parâmetros de viabilidade até o quinto dia de armazenamento, exceto o valor médio de pH (6,1± 0,59). As SAP avaliadas mantiveram os parâmetros até o nono dia, com destaque para a solução SSP+ que manteve estes parâmetros estáveis até o 13° dia de estoque. SSP+ e Composol parecem ser uma excelente alternativa de SAP para serem utilizadas no lugar do plasma na produção dos CP em bancos de sangue veterinários. O estoque prolongado, com manutenção da qualidade in vitro parece ser viável e com resultados semelhantes aos observados em trabalhos com plaquetas humanas.

The practice of blood transfusion began in the last century in human medicine, and has been evolving ever since. Research in this area is essential for better capacitating of veterinarians and to ensure the quality and promptness in assistance of the animals that require transfusion. The short storage time limits the amount of platelet concentrates (PC) that can be effectively used in transfusion centers which result in many units being discarded, with subsequent generation of expenditures and the need of finding new donors to meet the continuous demand for this blood component. The development of platelets preserving solutions provides storage of PC for long periods and is capable of reducing or avoiding adverse effects during storage, called platelet storage lesion. So, it will be possible to have a concentrate of better quality platelet to be transfused. This study aimed to evaluate the canine CP stored in different synthetic platelet additive solutions (SAP) for 13 days, and compare the additive solutions based on in vitro platelet metabolism. This study used 40 canine CP units, obtained with platelet rich plasma method, stored in the following additive solutions: Control group (100% plasma; n=13), SSP+ Group (n=13) and Composol Group (n=14). The parameters were evaluated on days 1, 5, 9 and 13 included: ATP, lactate, glucose, lactate dehydrogenase (LDH), pH, sodium, potassium, bicarbonate, pO2, pCO2, swirling, platelet count, residual leukocyte, platelet aggregation, bacterial culture labeling with monoclonal antibodies CD61 and CD62P (p-selectin), exposure of phosphatidylserine (PS) (Annexin V) and mitochondrial viability (ΔΨm) (JC-1 and Mitotracker Red and Green dyes). During the storage time was observed if the metabolic behavior is similar to that reported in studies with human platelets. In the storage period there was a reduction of ATP, pCO2, pH, ΔΨm (JC-1 aggregate and Mitotracker Red), bicarbonate and glucose; and increased percentage of CD62-P, Mitotracker Green and JC-1 monomer, increase of pO2, LDH, lactate and PDW levels. When comparing the SAP with the CP 100% plasma there were no significant differences in the following parameters: swirling, PDW, CD62-P, glucose, lactate, pH, pO2, pCO2, bicarbonate, PS and both ΔΨm techniques. In general it can be said that the 100% plasma group maintained the viability parameters until the fifth day of storage, with the exeption of pH average (6.1 ± 0.59). SAP evaluated parameters remained until the ninth day, highlighting the SSP+ solution that kept these parameters stable until the 13th day of storage. SSP+ and Composol seems to be an excellent alternative for use in place of the plasma in the production of the CP in veterinary blood banks. Prolonged storage time and in vitro quality maintenance appears to be feasible and have similar results to those observed in studies with human platelets.