Análise da expressão imunoistoquímica da proteína glucose-regulated protein 78 (GRP78) na carcinogênese bucal

Abstract

O processo de desenvolvimento e progressão do câncer de cabeça e pescoço não está bem esclarecido na literatura. O desafio atual é a busca por biomarcadores que, a partir de sua expressão, possam auxiliar no diagnóstico precoce e acompanhamento clínico da doença, aumentando as taxas de sobrevida dos pacientes com carcinoma espinocelular. Estresse crônico é altamente induzido no microambiente tumoral prejudicando a função do retículo endoplasmático resultando na expressão de GRP78, uma importante chaperona da via celular conhecida como Unfolded Protein Response, que ativa uma resposta de pró-sobrevivência e aumenta a resistência das células tumorais à apoptose. Alta expressão de GRP78 está associada a um comportamento tumoral mais agressivo e menor sobrevida em diversos tipos de câncer. Entretanto, o papel da GRP78 como indicador de prognóstico em pacientes com câncer de cabeça e pescoço ainda permanece indeterminado. O objetivo deste trabalho foi verificar se a expressão imunoistoquímica de GRP78 pode ser utilizada para comparar diferentes leucoplasias bucais e prever o potencial de transformação maligna destas lesões, além de verificar seu potencial como indicador de prognóstico no câncer de cabeça e pescoço. A amostra consistiu em 55 casos de carcinoma espinocelular, 57 casos de leucoplasia e 7 amostras de mucosa bucal normal. Nas lâminas histológicas dos tumores, foram capturadas imagens de cinco campos de três diferentes sítios: epitélio adjacente, centro do tumor, e fronte de invasão tumoral. Nas leucoplasias, toda a extensão de tecido epitelial visível foi capturada. Foi realizada a técnica imunoistoquímica para detecção de GRP78. Três examinadores cegos e calibrados (ICC = 0,83) calcularam a porcentagem da marcação imunoistoquímica multiplicando a quantidade de células coradas pela intensidade da coloração. A expressão de GRP78 foi correlacionada com as características clínico-patológicas da doença e o prognóstico do paciente, tanto em leucoplasias quanto em carcinoma espinocelular. Após cinco anos de acompanhamento, observamos que há um aumento significativo da expressão de GRP78 nas células tumorais em comparação às leucoplasias e à mucosa bucal normal. Os parâmetros clínico-patológicos avaliados e o prognóstico do paciente não interferiram de forma significativa na expressão de GRP78. Foi verificada uma diferença estatisticamente significativa da expressão de GRP78 no centro do tumor em pacientes com metástase regional quando comparados aos pacientes sem metástase regional (p = 0,048). Concluímos que a expressão de GRP78 não está correlacionada com a evolução da doença, e, portanto, não deve ser considerada um biomarcador de prognóstico em pacientes com leucoplasia e câncer de cabeça e pescoço.

The development and progression of head and neck cancer are unclear in the literature. The current challenge is the search for biomarkers that can assist in the early diagnosis and clinical management of the disease, increasing the survival rates of patients with squamous cell carcinoma. Chronic stress is highly induced in the tumor microenvironment impairing the endoplasmic reticulum (ER) normal function. ER stress results in GRP78 expression, a major chaperone of the cellular pathway known as Unfolded Protein Response, which activates a pro-survival response and increase tumor cells resistance to apoptosis. Overexpression of GRP78 is associated with aggressiveness and lower survival in several types of cancer. However, the role of GRP78 as a prognostic indicator in patients with head and neck cancer remains undetermined. The objective of this study was to determine if the GRP78 immunohistochemical expression can be used to compare different oral leukoplakia lesions and to predict the malignant potential of them, and to investigate its potential as a prognostic indicator in head and neck cancer. The sample consisted in 55 cases of squamous cell carcinoma, 57 cases of leukoplakia and 7 samples of normal oral mucosa. In histological slides of tumors, five fields of three different sites were captured: normal epithelium adjacent to the tumor, center of the tumor and invasive front of the tumor. In leukoplakia, the entire visible length of epithelial tissue has been captured. Immunohistochemistry was performed for GRP78 detection. Three blinded and calibrated pathologists (ICC = 0.83) calculated the percentage of immunohistochemical staining multiplying the amount of stained cells by the intensity of staining. GRP78 expression was correlated with clinicopathological features of the disease and patient's prognosis. After five years of follow-up, we observed that there is a significant increase of GRP78 expression in tumor cells compared to leukoplakia and normal oral mucosa. Clinicopathological parameters evaluated and patient's prognosis did not interfere significantly in GRP78 expression. A statistically significant difference of GRP78 expression in the center of the tumor in patients with regional metastasis was observed when compared to patients without regional metastasis (p = 0.048). We conclude that GRP78 expression does not correlate with disease progression, and, therefore, should not be considered a prognostic biomarker in patients with leukoplakia and head and neck cancer.