Efeito da suplementação de probióticos sobre a permeabilidade intestinal através dos níveis séricos de claudina-3 em pacientes com esteato-hepatite não alcoólica

Abstract

Parece existir associação clínica entre o aumento de permeabilidade intestinal (PI) e complicações de doenças metabólicas, incluindo esteato hepatite não-alcoólica (EHNA). Marcadores indiretos da PI vem sendo explorados nas últimas décadas para a detecção de um ambiente com alterações de permeabilidade. Claudina-3 (CLD-3) em conjunto com outras proteínas do complexo juncional formam as Tight junctions (TJ), junções que ligam o espaço paracelular da barreira intestinal. Sabe-se que a disbiose intestinal contribui na ruptura das TJ, implicando em maiores concentrações séricas de CLD -3 e, portanto, aumento de PI. O intestino mais permeável permite promoção de uma inflamação de baixo grau crônica pelo aumento da passagem de subprodutos intestinais ao fígado, via circulação portal. O percurso envolvido nesta relação, ainda é obscuro. O aumento na prevalência da EHNA previsto para as próximas décadas reforça a necessidade de estudos que identifiquem novos alvos terapêuticos para melhor manejo da doença. Os probióticos podem conferir benefícios à microbiota intestinal, fortalecendo a barreira intestinal. A suplementação tem como objetivo proporcionar maior resistência contra patógenos, através da diversidade de micróbios, a fim de evitar um ambiente fragilizado pela disbiose. Assim, o objetivo do presente trabalho foi avaliar o efeito da suplementação de probióticos sobre o marcador indireto de permeabilidade intestinal CLD-3 sérica em pacientes com EHNA. Este ensaio clínico duplo-cego randomizado inclui 46 pacientes adultos com esteato hepatite não-alcoólica diagnosticado por meio de biópsia hepática NAS > 4 de acordo com NASH Clinical Research Network NAFLD activity score (NAS), em tratamento ambulatorial nos serviços de Gastroenterologia e Nutrição e Dietética do Hospital de Clínicas de Porto Alegre, Brasil. Os pacientes foram distribuídos em dois grupos, intervenção e placebo. A intervenção consistiu em um período de 24 semanas por meio de suplementação com 2g diárias de mix de probióticos (composto por Lactobacillus acidophillus, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus paracasei e Bifidobacterium lactis, 1x109UFC em cada cepa). Foram avaliadas as alterações nos seguintes parâmetros: dados dietéticos a partir de recordatório alimentar de 3 dias, dados antropométricos com aferição de peso, altura e circunferência da cintura, dados laboratoriais e de CLD-3 através de coleta de sangue. Para análise dos dados utilizamos o método de Equações de Estimações Generalizadas para comparações entre o grupo probiótico e grupo placebo. O nível de significância adotado foi de p<0,05. Quarenta e quatro pacientes com idade média de 51 anos concluíram o ensaio. Destes, 27 eram do sexo masculino, 87% dos participantes apresentavam estágios iniciais de fibrose, classificados em F0 ou F1. Os níveis basais de CLD-3 entre os grupos eram similares no início do estudo, entretanto, ao final das 24 semanas, houve redução nos níveis séricos de CLD-3 no grupo Probiótico (14,7 + 5,97ng/mL para 6,1 + 1,6 ng/mL) e no Placebo (16,7 + 6,02 para 6 + 1,95 ng/mL), ambos com p<0,01, entretanto, sem diferença entre grupos. Quanto à dieta, houve redução no consumo de calorias totais, carboidratos, proteínas e gorduras ao longo do estudo (p<0,05), sem diferença entre grupos. Ao longo das 24 semanas não se verificou alterações de peso e circunferência de cintura como medidas antropométricas. CLD-3 reduziu de forma significativa nos pacientes com esteato hepatite não-alcoólica durante o período de intervenção. No entanto, não se observou alteração pelo efeito da suplementação com probióticos. Estudos com maior tempo de acompanhamento serão necessários para validar CLD-3 como marcador de permeabilidade intestinal.

There seems to be a clinical association between increased intestinal permeability (IP) and complications from metabolic diseases, including non-alcoholic steatohepatitis (NASH). Indirect IP markers have been explored in recent decades to detect an environment with permeability alterations. Claudin-3 (CLD-3) and other junctional complex proteins form the Tight Junctions (TJ), which connect the paracellular space of the intestinal barrier. The intestinal dysbiosis contributes to TJ rupture, implying higher serum concentrations of CLD -3 and, therefore, an increase in IP. The more permeable intestine promotes a chronic low-grade inflammation by increasing the passage of intestinal by-products to the liver via the portal circulation. The path involved in this relationship is still unclear. The increasing prevalence of NASH predicted for the next decades reinforces the need for studies to identify new therapeutic targets for better disease management. Probiotics can provide benefits to the intestinal microbiota, strengthening the intestinal barrier. Supplementation aims to provide more excellent resistance against pathogens through the diversity of microbes to avoid an environment weakened by dysbiosis. Thus, the present work aimed to evaluate the effect of probiotic supplementation on the indirect marker of serum intestinal permeability CLD-3 in patients with NASH. This double-blind, randomized clinical trial includes 46 adult patients with non-alcoholic steatohepatitis diagnosed by liver biopsy NASH > 4, according to the NASH Clinical Research Network NAFLD activity score (NAS), under outpatient treatment in the Gastroenterology and Nutrition services and Dietetics at the Hospital de Clinicas de Porto Alegre, Brazil. Patients were divided into two groups: intervention and placebo. The intervention consisted of 24 weeks of 2g daily probiotic mix supplementation (Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus paracasei, and Bifidobacterium lactis, 8 1x109 CFU in each strain). The study evaluated changes in the following parameters: dietary data from a 3-day dietary recall, anthropometric data with weight measurement, height and waist circumference, laboratory data, and CLD-3 through blood collection. We used the Generalized Estimating Equations method for comparisons between the probiotic group and the placebo group for data analysis. Forty-four patients with a mean age of 51 years completed the trial. Of these, 27 were male. Eighty-seven percent of participants had early stages of fibrosis, classified as F0 or F1. Baseline levels of CLD-3 between groups were similar at baseline. However, at the end of 24 weeks, there was a reduction in serum CLD-3 levels in the Probiotic group (14,7 + 5,97ng/mL to 6,1 + 1,6 ng/mL) and in the Placebo group (16,7 + 6,02 to 6 + 1,95 ng/mL), both with p<0.01. No change was observed due to the effect of supplementation with probiotics. As for the diet, there was a reduction in the consumption of total calories, carbohydrates, proteins, and fats throughout the study (p<0.05), with no difference between groups. Over the 24 weeks, there were no changes in weight or waist circumference. Studies with longer follow-up are necessary to validate CLD-3 as a marker of intestinal permeability. CLD-3 significantly reduced in patients with NASH during the intervention period. However, no change was observed due to the effect of supplementation with probiotics.