Influência das catecolaminas norepinefrina e epinefrina na formação de biofilme em isolados de Salmonella enteritidis

Abstract

A sanidade das aves, a inocuidade dos alimentos e a tecnologia de produção são grandes atributos do sistema de produção da cadeia avícola brasileira. No intenso processo de criação das aves, o aumento da excreção de patógenos como Salmonella, tem sido relacionado com o estresse associado à interação social, à manipulação e ao transporte das aves até a linha de abate. Situações de estresse ocasionam a liberação de hormônios como as catecolaminas (epinefrina e norepinefrina) que podem interferir na microbiota pela sinalização das bactérias do trato gastrointestinal. A epinefrina e a norepinefrina produzidas pelos animais utilizam a mesma via de sinalização bacteriana denominados de Auto-indutores Tipo 3. Esses auto-indutores regulam uma gama de atividades como a simbiose, a virulência, a competência, a conjugação, a motilidade, a esporulação e formação de biofilmes. O presente trabalho teve como objetivo avaliar o efeito das catecolaminas epinefrina e norepinefrina como indutores na formação de biofilmes em 30 isolados de Salmonella Enteritidis provenientes de produtos avícolas e de produtos envolvidos em surtos de salmonelose em humanos e também avaliar a presença dos genes associados na formação de biofilme csgD, adrA e fimA. As cepas de Salmonella Enteritidis utilizadas foram isoladas de pintos de um dia, carne de frango, suabe de arrasto e surtos de salmonelose. Foram testadas duas concentrações de epinefrina e norepinefrina (50μM e 100μM) e duas temperaturas de incubação: 12°C (temperatura da sala de cortes) e a 25°C (temperatura ambiente). O ensaio de formação de biofilme foi feito em placas de poliestireno pela metodologia de coloração de cristal violeta. Dentre os resultados encontrados, cepas incubadas a 25°C apresentaram maior formação de biofilme quando comparadas àquelas incubadas a 12°C. A norepinefrina na concentração de 100 μM estimulou a formação de biofilme por cepas de Salmonella Enteritidis quando incubadas a temperatura de 12°C. Não houve interferência das catecolaminas (epinefrina e norepinefrina) nos ensaios de formação de biofilme a temperatura de 25°C nas concentrações utilizadas e todas as cepas avaliadas no presente trabalho apresentaram os três genes (csgD, adrA e fimA) associados a formação de biofilme pesquisados.

Poultry health, food safety and food production technology are major attributes from the Brazilian poultry chain. Stress associated with poultry transport or mixing has long been correlated with enhanced faecal excretion of diarrheal zoonotic pathogens in animals such as Salmonella enterica. Stress situations release hormones (such catecholamines - epinephrine and norepinephrine) that can influence the microbiota by signaling the bacteria from the gastrointestinal tract, so they are able to initiate the multiplication process and the production of virulence factors as part of the process infectious diseases. Epinephrine and norepinephrine produced by the animals use the same pathway of the bacteria, called Auto Inducer Type 3. These auto-inducers regulate a range of activities such as symbiosis, virulence, competence, conjugation, motility, sporulation and biofilm formation. The Salmonella ability to makes complexes associated to surfaces, called biofilms, contributes to its persistence and resistance in both host and non-host environments and is especially important in environments used in food processing. The present paper evaluated the influence of catecholamines epinephrine and norepinephrine on the biofilm formation about 30 samples of Salmonella Enteritidis from poultry products and products involved in salmonellosis outbreaks and to evaluate the presence of associated genes in the biofilm formation (csgD, adrA and fimA). The strains of Salmonella Enteritidis used were isolated from day-old chicks, chicken meat, drag swabs and salmonellosis outbreaks. Two epinephrine and norepinephrine concentrations were used (50μM and 100μM) and two incubation temperatures were analyzed: 12°C (required by the Brazilian sanitary service in cutting rooms of broiler processing plants) and 25°C (room temperature).The biofilm assay was done on polystyrene plates by violet crystal staining methodology. Samples incubated at 25°C produced higher biofilm formation them samples incubated at 12°C. The norepinephrine concentration of 100 μM has stimulated the biofilm formation of Salmonella Enteritidis strains when incubated at 12°C. At 25°C, there was no catecholamine (epinephrine and norepinephrine) influence in the biofilm assay in the concentrations used. All the samples evaluated in the present study were positive for the genes csgD, adrA and fimA associated with biofilm formation investigated.