Avaliação do potencial antimicrobiano de extratos obtidos com diferentes solventes de aroeira (Schinus terebinthifolius Raddi) e chinchilho (Tagetes minuta Linnaeus)

Abstract

Diversas plantas têm sido utilizadas para o tratamento de enfermidades de importância em medicina veterinária e vêm despertando interesse da comunidade científica quanto a sua ação antimicrobiana como as espécies, Schinus terebenthifolius Raddi e Tagetes minuta Linnaeus. Devido à importância do conhecimento do potencial da atividade antimicrobiana destas espécies, objetivou-se: (i) avaliar a ação antimicrobiana de extratos de diferentes partes das plantas obtidos com solventes de diferentes polaridades e do óleo essencial de Schinus terebinthifolius Raddi e Tagetes minuta L.; (ii) determinar os extratos mais eficazes no controle da atividade antimicrobiana frente às bactérias isoladas de leite bovino; (iii) analisar o sinergismo in vitro das diferentes partes das plantas com antimicrobianos comerciais; (iv) avaliar os efeitos citotóxicos dos extratos mais eficientes; (vi) avaliar o rendimento dos óleos essenciais das diferentes partes das plantas; (vii) avaliar a atividade antimicrobiana do óleo essencial extraído de diversas partes das plantas; (viii) caracterizar os compostos fenólicos e antocianinas. O material vegetal foi encaminhado para extração no aparelho Soxhlet pelo método IUPAC 1.122 (1979) com uso de cinco diferentes solventes e para o óleo essencial por hidrodestilação em Clevenger. Para realização dos testes in vitro foi utilizado o método de microdiluição serial em placas para ser determinada a concentração inibitória mínima (CIM), Os microrganismos testados foram: Escherichia coli (ATCC 8739), Pseudomonas aeruginosa (ATCC 15442), Staphylococcus aureus (ATCC 12600), Staphylococcus sp. e Streptococcus agalactiae. Foram realizados antibiogramas controle e tratamento através da metodologia dos discos adaptada, utilizados os seguintes antibióticos, amoxicilina, ampicilina, gentamicina, penicilina e tetraciclina. Para os testes de citoxicidade utilizou microplacas contendo Meio Essencial Mínimo (MEM), soro fetal bovino a 10% (Gibco), enrofloxacina (10mg ml-1) e anfotericina B (0,025 μg ml1), e preparadas células da linhagem MDBK (Madin-Darby bovine kidney). A quantificação dos compostos fenólicos totais dos extratos foi de acordo com Swain e Hillis (1959) com adaptações. O extrato metanólico apresentou melhor resultado contra as bactérias Gram positivas, o extrato metanólico aroeira fruto maduro apresentou, valores de CIM significativos frentes as cepas Gram negativas. Os extratos metanólico da folha do chinchilho apresentoram melhor resultado contra todas as cepas, e o extrato chinchilho flor metanol mostrou maior eficiência para as bactérias Gram-negativas. A maior porcentagem de teor de óleo essencial foi no fruto maduro 5,85% e o menor valor foi na folha verde 0,52%. Os óleos com menores valores de CIM foi folha verde e do fruto maduro, para as bactérias Staphylococcus sp. 6%, e Staphylococcus aureus ATCC 8% respectivamente. No chinchilho a maior porcentagem de teor de óleo essencial foi na folha, com valor de 1,11% e na flor com o valor de 0,68%. Os menores valores de CIM em relação às bactérias Gram negativas foi às partes da folha e da flor do chinchilho para a bactéria Escherichia coli ATCC de 20%. A semente foi o melhor resultado sobre a cepa de Staphylococcus aureus ATCC, valor de CIM de 25%. O gênero Streptococcus apresentou efeitos sinérgicos frente aos antibióticos utilizados nas associações com os extratos, o extrato Chinchilho Folha foi menos tóxico, viabilidade celular de 96%.

Several plants have been used for the treatment of diseases of importance in veterinary medicine and have attracted interest from the scientific community and its antimicrobial action such as species, Schinus terebenthifolius Raddi and Tagetes minuta Linnaeus. Due to the importance of knowing the potential of the antimicrobial activity of these species, aimed to: (i) to evaluate the antimicrobial activity of extracts from different parts of plants obtained using solvents of different polarities and the essential oil of Schinus terebinthifolius Raddi and Tagetes minuta L. ; (ii) determine the most effective extracts in controlling antimicrobial activity against bacteria isolated from bovine milk; (iii) analyze the synergism in vitro of different plant parts with commercial antimicrobials; (iv) evaluate the cytotoxic effects of the most efficient extracts; (vi) evaluate the performance of essential oils from different parts of plants; (vii) evaluate the antimicrobial activity of the essential oil extracted from different parts of plants; (viii) characterizing the anthocyanins and phenolic compounds. The plant material was submitted to extraction in Soxhlet apparatus by IUPAC method 1122 (1979) using five different solvents and the essential oil by hydrodistillation in a Clevenger. To perform the in vitro tests we used the method of serial microdilution plates to be determined the minimum inhibitory concentration (MIC). The microorganisms tested were Escherichia coli (ATCC 8739), Pseudomonas aeruginosa (ATCC 15442), Staphylococcus aureus (ATCC 12600), Staphylococcus sp. and Streptococcus agalactiae. Antibiogram control and treatment were performed using the methodology adapted records used the following antibiotics amoxicillin, ampicillin, gentamicin, penicillin and tetracycline. For cytotoxicity tests used microplate containing Minimum Essential Medium (MEM), fetal bovine serum 10% (Gibco), enrofloxacin (10 mg ml-1) and amphotericin B (0.025 μg ml -1) and MDBK cells prepared from strain (Madin- Darby bovine kidney). The quantification of the phenolic compounds in the extracts were according to Swain and Hillis (1959) with some adjustments. The methanol extract showed better result against Gram positive bacteria, mastic ripe fruit methanol extract showed, significant MIC values fronts gram-negative strains. The methanol extract of Chinchilho sheet apresentoram best result against all strains, and the methanol extract Chinchilho flower showed greater efficiency for Gram-negative bacteria. The highest percentage of essential oil content in mature fruits was 5.85% and the lowest value was 0.52% on green leaf. Oils with lower MIC values was green and ripe fruit sheet for the bacteria Staphylococcus sp. 6%, and Staphylococcus aureus ATCC 8% respectively. In Chinchilho the highest percentage of essential oil content was on the sheet, with a value of 1.11% and in bloom with the value of 0.68%. The lowest MIC values in relation to Gram negative bacteria were the parts of the leaf and flower Chinchilho for the bacterium Escherichia coli ATCC 20%. The seed is the best result for the strain of Staphylococcus aureus ATCC MIC value of 25%. The genus Streptococcus showed synergistic effects compared to the antibiotics used in association with the extracts, the Chinchilho leaf extract was less toxic, cell viability was 96%.