Cimentos endodônticos biocerâmicos : avaliação da citotoxicidade, bioatividade e migração celular em cultura de células-tronco

Abstract

O objetivo deste estudo foi avaliar as propriedades biológicas dos cimentos endodônticos biocerâmicos Sealer Plus BC e MTA Fillapex, e dos cimentos à base de resina epóxi Sealer Plus e AH Plus em cultura de células-tronco da papila dentária humana. Os cimentos foram manipulados e colocados em contato com meio de cultura para confecção de extratos na concentração de 10%. Foi utilizado o meio de cultura DMEM como controle negativo. Foram realizados ensaios de MTT e SRB para avaliar a viabilidade celular, o ensaio de Scratch para avaliar a taxa de migração celular. Para avaliar a bioatividade dos cimentos, foi avaliada a atividade enzimática da Fosfatase Alcalina (ALP), considerando um marcador odontoblástico e osteoblástico, e a coloração de Alizarin Red (ALZ), o qual identifica depósitos de cálcio na cultura celular. Todos os resultados obtidos foram paramétricos, sendo utilizado o teste One-way ANOVA e post hoc de Tukey e o teste T, por meio do software GraphPadPrism 5 (GraphPad Software, 2012), sendo considerado o nível de significância de 5%. Todos os cimentos estudados apresentaram viabilidade celular para os testes de MTT e SRB. Para o ensaio de migração celular, os cimentos Sealer Plus BC e MTA Fillapex obtiveram o completo fechamento da ferida no período de 48h, o Sealer Plus e o AH Plus não obtiveram o fechamento nas 72h de estudo, com alteração da morfologia celular para o AH Plus. Para os resultados de bioatividade, o ensaio de ALP mostrou que no período experimental de 24h, o Sealer Plus e o MTA Fillapex apresentaram valores significativamente menores em relação ao controle, no período de 7 dias, apenas o Sealer Plus apresentou uma menor bioatividade que o controle e aos 14 dias, todos os materiais estudados foram semelhantes ao controle, o ensaio de ALZ mostrou presença de nódulos mineralizados em todos os cimentos, sem formação para o grupo controle. Em conclusão, todos os materiais foram viáveis e apresentaram resposta positiva em relação à bioatividade, com destaque para o Sealer Plus BC. A taxa de migração celular foi maior para os cimentos Sealer Plus BC e MTA Fillapex.

This study aimed to evaluate the biological properties of the bioceramic endodontics sealers Sealer Plus BC and MTA Fillapex and of epoxy-resin based sealers Sealer Plus and AH Plus in cell culture of the dental apical papilla. The sealers were manipulated and placed in contact with culture medium for preparation of extract at 10% concentration. The DMEM culture medium was used as the negative control. MTT and SRB assays were performed to evaluate the cell viability, the Scratch assay to evaluate the rate of cell migration. To evaluate the sealers bioactivity, the enzymatic activity of alkaline phosphatase (ALP) was used, considering an odontoblastic and osteoblastic marker, and coloration of Alizarin Red (ALZ), which identifies deposits of calcium and phosphatase in the cell culture. All the results obtained were parametric, using One-way ANOVA and post-hoc the Tukey test and T-test, using the GraphPadPrism 5 software (GraphPad Software, 2012), it was considered the level of significance of 5%. All the studied materials presented cell viability for the MTT and SRB tests. For the cell migration assay, Sealer Plus BC and MTA Fillapex sealers obtained complete wound closure within 48 hours, Sealer Plus and AH Plus did not obtain closure within 72 hours of study, with alteration of cellular morphology for AH Plus. For the bioactivity results, the ALP assay showed in the 24 hour experimental period, Sealer Plus and MTA Fillapex showed significantly lower values in relation to the control, in the period of 7 days, only Sealer Plus presented a lower bioactivity then the control and at 14 days, all the sealers studied were similar to the control group. The ALZ assay showed the presence of mineralized nodules in all sealers, with no formation for the control group. In conclusion, all materials were viable and presented a positive response concerning bioactivity, with emphasis on Sealer Plus BC. The cell migration rate was higher for Sealer Plus BC and MTA Fillapex sealers.