Análise da perda de heterozigosidade em leucoplasias bucais

Abstract

É importante detectar os indivíduos com maior risco de desenvolver câncer de boca para que estratégias de prevenção possam ser implementadas. A leucoplasia é a lesão potencialmente maligna mais comum da cavidade bucal e sua transformação maligna é associada com a perda de heterozigosidade (LOH) na região 9p21. Os estudos realizados sobre LOH em leucoplasia até o momento utilizaram DNA extraído de amostras de biópsias. No entanto, seria importante a utilização da citopatologia para a obtenção de DNA, visto que esta é uma forma de coleta não invasiva e inócua, que permite várias coletas ao longo do tempo. No entanto, é preciso primeiramente, verificar se o DNA obtido pela citopatologia é comparável ao DNA obtido pelos métodos já utilizados na literatura. Portanto, o objetivo deste estudo é avaliar a frequência de LOH de indivíduos com leucoplasia bucal, a partir da citopatologia e do tecido obtido pela biópsia. Para tanto, 22 indivíduos foram incluídos no estudo após assinatura do TCLE. De cada indivíduo foi obtida uma amostra citológica realizando o esfregaço na superfície da lesão, uma amostra de sangue periférico para obtenção de DNA controle e foi realizada a biópsia da lesão. O DNA da amostra citológica e do sangue foi extraído a partir de cartões FTA. Foram realizados cortes histológicos dos blocos de parafina, e os tecidos epitelial e conjuntivo foram microdissectados. O DNA das amostras teciduais foi extraído utilizando-se o DNAmini Kit. Foi realizada a reação de PCR dos DNAs com o marcador de microssatélite da região 9p21 IFNA. A seguir os produtos do PCR foram submetidos à eletroforese capilar e os dados analisados. A LOH foi observada em 6 amostras, confirmado pelos dois métodos. A distribuição dos eventos de LOH foi observada em amostras não displásicas (n=4) e displásicas (n=2). A maior parte de LOH detectada foi em pacientes não fumantes (n=4). A análise do microssatélite IFNA nas amostras por citopatologia revelou 45,4% de LOH, enquanto que a análise nas amostras biopsiadas revelou 27,3% de LOH. Das 22 amostras no total, observamos concordância apenas em 15 casos (68,2%). A análise pelo teste de qui-quadrado confirmou que não há associação estatística entre as análises realizadas. Portanto, os dois métodos de coleta para análise de LOH não são comparáveis

It is important to detect individuals at higher risk of developing oral cancer so prevention strategies can be implemented. Leukoplakia is the most common potentially malignant lesion of the oral cavity and its malignant transformation is associated with loss of heterozygosity (LOH) in the 9p21 locus. Studies of LOH in leukoplakia have so far used DNA extracted from biopsy specimens. However, it would be important to use cytopathology to obtain DNA, since this is a non-invasive and innocuous collection method that allows several collections over time. However, it is necessary first to verify if the DNA obtained by cytopathology is comparable to the DNA obtained by the methods already used in the literature. Therefore, the objective of this study is to evaluate the frequency of LOH in individuals with oral leukoplakia, from cytopathology and tissue obtained by biopsy. For this, 22 individuals were included in the study after signing the TCLE. From each individual, a cytological sample was obtained by scraping the lesion surface, a peripheral blood sample to obtain control DNA and the biopsy of the lesion was performed. DNA from the cytological sample and blood was extracted from FTA cards. Histological sections of paraffin blocks were made, and the epithelial and connective tissues were microdissected. The DNA from the tissue samples was extracted using DNAmini Kit. PCR reaction of the DNAs with the microsatellite marker of the 9p21 IFNA region was performed. Next, the PCR products were submitted to capillary electrophoresis and the data analyzed. The LOH was observed in 6 samples, confirmed by both methods. The LOH events were observed in non-dysplastic (n=4) and dysplastic (n = 2) lesions. Most of the LOH detected was in nonsmoking patients (n = 4). Analysis of the microsatellite IFNA in the samples by cytopathology showed 45.4% of LOH, whereas the analysis in the biopsied samples revealed 27.3% of LOH. Of the 22 samples in total, we observed agreement only in 15 cases (68.2%). The chi-square test confirmed that there was no statistical association between the analyzes performed. Therefore, the two methods of sample collection for LOH analysis assessed are not comparable