Análise pela espectroscopia Raman de amostra de tecido bucal de ratos Wistar em diferentes métodos de armazenamento

Abstract

A Espectroscopia Raman é uma tecnologia ótica que vem sendo estudada na área da saúde para uso em diagnóstico, devido a sua capacidade de fornecer informações sobre a composição bioquímica da amostra. O método de condicionamento de amostras que são analisados no espectro Raman com o objetivo de diagnóstico, varia entre os estudos. O objetivo deste trabalho foi verificar se há diferenças moleculares pela espectroscopia Raman (ER) de amostras de tecido analisadas antes e após a fixação com formol a 10%. Foram avaliadas 5 (cinco) línguas de ratos do tipo Wistar armazenadas a -80°C. Estas amostras foram descongeladas e submetidas a ER. Em seguida, foram fixadas em formalina tamponada neutra e após 72h um novo espectro Raman foi obtido. De cada amostra foi selecionada 2 áreas distintas, uma de epitélio de superfície, outra de tecido conjuntivo. Os espectros de Raman foram obtidos num espectrômetro Raman (Senterra, Bruker Optics, Ettlingen, Alemanha). A região espectral analisada foi de 500 a 1500 cm-1 , sendo que o espectro resultante de média da leitura de 10 pontos, uma em epitélio e uma em conjuntivo. Os resultados da análise dos picos espectrais das médias de cada grupo mostram uma menor alteração molecular do tecido epitelial após a fixação pelo formol, já em relação ao tecido conjuntivo houve grandes alterações no tecido após a fixação. As conclusões são de que este estudo sugere que a ER pode ser usada em diagnóstico em tecido epitelial independente da fixação, mas em tecido conjuntivo deve-se cuidar qual o tipo de fixação do tecido que será analisado, pois ele sofre mais alterações no processo de fixação com formol.

Raman Spectroscopy is an optical technology that has been studied in the health area for diagnostic use due to its ability to provide information about the biochemical composition of the sample. The method of samples conditioning that are analyzed in the Raman spectrum with the objective of diagnosis, varies between the studies. The objective of this work was to verify if there are molecular differences by Raman spectroscopy (ER) of tissue samples analyzed before and after the fixation with 10% formalin. Five (5) tongues of Wistar rats were evaluated stored at -80°C. These samples were unfrozen and subjected to ER. Then, they were fixed in neutral buffered formalin and after 72 hours a new Raman spectrum was obtained. From each sample was selected 2 distinct areas, one of surface epithelium, the other of connective tissue. Raman spectra were obtained on a Raman spectrometer (Senterra, Bruker Optics, Ettlingen, Germany). The spectral region analyzed was 500 to 1500 cm-1 , the resulting spectrum of 10 point reading average, one in epithelium and one in conjunctiva. The results of the analysis of the spectral peaks from the averages of each group show a smaller molecular alteration of the epithelial tissue after the fixation by the formalin, however in relation to the connective tissue there were great alterations in the tissue after the fixation. In conclusion this study suggests that ER can be used for the diagnosis in epithelial tissue independent of fixation, but in connective tissue one must take care with the type of tissue fixation that will be analyzed, since it undergoes more changes in the fixation process with formaldehyde.