Novas formas farmacêuticas contendo óleo volátil de cymbopogon citratus : estudos de formulação, estabilidade e atividade biológica

Abstract

Neste trabalho foram desenvolvidas novas formulações contendo o óleo volátil de C. citratus (emulsões e géis) para avaliação biológica e estabilidade. O óleo volátil, obtido comercialmente, foi caracterizado em relação ao teor de citral, por CG (76%), e sua atividade antifúngica frente a espécies de Candida foi, também, estudada. O óleo volátil apresentou atividade frente a todas as espécies de Candida empregadas. A atividade antifúngica do citral, seu principal componente, foi avaliada, obtendo-se resultados semelhantes. O óleo volátil foi incorporado em suspensão de nanocápsulas e os resultados obtidos na sua caracterização possibilitaram a incorporação de tais sistemas em uma base semi-sólida. As formulações semi-sólidas foram avaliadas em relação a suas propriedades físico-químicas (caracteres organolépticos, pH, centrifugação e viscosidade) e atividade antifúngica in vitro frente à C. albicans e fungos dermatófitos. As preparações apresentaram atividade contra os fungos estudados, inibindo, totalmente, o crescimento das espécies M. canis e T. rubrum. Em virtude das características apresentadas, as emulsões foram selecionadas para posterior avaliação da estabilidade, toxicidade dérmica e atividade antifúngica in vivo. Adicionalmente, um novo método de quantificação de citral foi desenvolvido e validado, por CLAE. O método proposto mostrou-se linear, preciso, exato e específico, e possibilitou quantificar tal substância no óleo volátil, nas suspensões de nanocápsulas e nas emulsões semisólidas. A estabilidade fotoquímica do óleo volátil foi avaliada. Testes acelerados foram conduzidos com o óleo volátil e citral, expostos à lâmpada germicida (254 nm), por um período de 16 dias. A concentração de citral nas amostras foi avaliada por CLAE e a cinética de degradação foi, também, estimada. Uma menor velocidade de degradação de citral no óleo volátil foi verificada. As emulsões contendo o óleo volátil foram estudadas em relação à estabilidade térmica, as temperaturas de 7, 25 e 40 ºC. Verificou-se que o calor interfere na estabilidade do citral, e os produtos foram estáveis quando armazenados a temperatura de 7 ºC, por 180 dias. Ensaios in vivo e in vitro de toxicidade dérmica foram realizados para as emulsões, as quais apresentaram grau de irritação leve nos ensaios em animais. Diferenças foram obtidas nos testes de citotoxicidade, demonstrando a maior sensibilidade das culturas celulares e sua aplicação no desenvolvimento de novos produtos. Um estudo preliminar pré-clínico foi conduzido em cobaias para avaliação da atividade antifúngica in vivo. Após infecção com cepa patogênica de C. albicans, os animais foram tratados, topicamente, com as amostras e apresentaram uma melhora das infecções, evidenciada pelo crescimento dos pêlos.

In this work, new formulations containing C. citratus volatile oil were developed (emulsions and gels) and their biological properties and stability were studied. The citral content in the volatile oil (comercially obtained) was determined by GC (76%), and the antifungal activity against Candida species was studied. The oil and its major component, citral, exhibited action against all Candida spp. Nanocapsules suspensions and semisolid formulations containing C. citratus volatile oil were prepared, and the physico-chemical properties were evaluated (organoleptic characteristics, pH, centrifugation test and viscosity). The in vitro antifungal activity against C. albicans and dermatophytes fungals were evaluated for the semisolid formulations. The growing of the M. canis and T. rubrum species was totally inhibited by the preparations tested. The emulsions were selected and their stability, dermal toxicity and in vivo antifungal activity were evaluated. In addition, a new HPLC method to quantify the citral contents was developed and validated. The HPLC method showed good performance and demonstrated to be linear, precise, accurate and sensitive. It could be used to quantify citral in volatile oil, nanocapsules suspensions and semisolid emulsions. The photostability of the volatile oil was also evaluated. Accelerated stability tests were conducted with volatile oil and reference citral. The samples were exposed to germicidal lamps (254 nm) for 16 days. The content of citral in the samples was determined by HPLC and the kinetic degradation was estimated. In the volatile oil, the rate of citral degradation was lower than in the reference citral. The thermal stability of the emulsions was studied at 7, 25 and 40 ºC. It was observed that heat afected the citral stability. The products were stable at 7 ºC for 180 days. In vivo and in vitro tests of dermal toxicity were conducted. The emulsions containing volatile oil were classified as slightly irritant in animal tests. Moreover, the in vitro tests showed that the cellular cultures were more sensitive, and can be applied in the development of the new products. In the in vivo antifungal activity, a preliminary preclinical study was conducted using guinea pigs. The animals were infected with pathogenic C. albicans yeast, and after, topically treated with the formulations. The improvement of the infections was observed and evaluated by hear growing.