Efeitos do retinol (vitamina A) frente à citotoxicidade causada pela 6-hidroxidopamina em células SH-SY5Y

Abstract

Retinol (vitamina A) é um componente essencial na dieta, devido a suas ações biológicas variadas nos tecidos, incluindo o sistema nervoso central. O retinol age como anti ou como pró-oxidante, a depender do ambiente, uma propiedade chamada redox-ativa. A doença de Parkinson (DP) é uma patologia predominantemente relacionada à idade na qual neurônios dopaminérgicos na substância negra são progressivamente denervados. A 6-hidroxidopamina (6-OHDA) é uma neurotoxina capaz de induzir parkinsonismo in vivo. Neste trabalho, avaliamos se o retinol é capaz de prevenir a injúria causada por 6-OHDA na linhagem celular de neuroblastoma humano SH-SY5Y, um modelo de estudo da DP in vitro. As células foram pré-tratadas com retinol 1 e 5 μM 1 h antes de receber 6-OHDA 30 e 50 μM e as análises foram feitas após 24 h. A viabilidade celular foi avaliada pelos ensaios de incorporação de suforrodamina e de atividade de lactato-desidrogenase no meio de cultura; efetuamos ensaio de DCFH para produção de espécies reativas (ER); ELISA e Western blot para o imunoconteúdo de 4-hidroxinonenal (4-HNE) e nitrotirosina (nitroTyr). Além disso, foram realizados ensaios espectrofotométricos para conteúdo de grupos sulfidril (SH) e atividade de catalase (Cat), superóxido-dismutase (SOD), glutationa-peroxidase (GPx) e glutationa-S-transferase (GST). O retinol foi incapaz de prevenir a morte celular provocada pela 6-OHDA, assim como a produção de ER e dano oxidativo. A atividade de Cat e GPx não sofreu alteração em nenhum grupo experimental. A atividade de SOD aumentou no grupo retinol + 6-OHDA em relação ao controle, enquanto a atividade de GST aumentou no grupo somente retinol em relação ao grupo somente 6-OHDA. Concluímos que o retinol é incapaz de conferir neuroproteção neste modelo de estudo da DP, e estudos futuros com outros modelos são necessários para obtermos uma conclusão sobre as propriedades anti ou proneurodegenerativas do retinol em relação à DP.

Retinol (vitamin A) is an essential component in diet due to several biological actions in tissues, including central nervous system. Retinol acts either as anti or as prooxidant, depending on the environment, a property called redox-active action. Parkinson’s disease (PD) is a predominantly age-related pathology in which dopaminergic neurons in the substantia nigra are progressively denervated. 6-hydroxydopamine (6-OHDA) is a neurotoxin able to induce parkinsonism in vivo. Here we tested if retinol prevents 6-OHDA-injury in SH-SY5Y human neuroblastoma cell line, a model for PD study in vitro. Cells were pretreated with retinol 1-5 μM 1 h before receiving 6-OHDA 30-50 μM. Analyses were performed after 24 h. We evaluated cell viability by sulforhodamine incorporation and lactate-dehydrogenase activity in culture medium assays; we performed DCFH assay for reactive species (RS) production; ELISA and Western blot for 4-hydroxynonenal (4-HNE) and nitrotyrosine (nitroTyr) immunocontents; and spectrophotometric assays for sulfhydryl (SH) groups content, as well as catalase (Cat), superoxide-dismutase (SOD), glutathione-peroxidase (GPx), and glutathione-S-transferase (GST) activities. Retinol was unable to prevent 6-OHDA-induced cell death, as well as RS production and oxidative damage. Cat and GPx activities did not change in any experimental group. SOD activity was increased in retinol + 6-OHDA group relative to control. GST activity was increased in retinol alone group relative to 6-OHDA alone group. We conclude that retinol is unable to confer neuroprotection in this PD study model, and future studies with other PD models are needed to have a better conclusion about retinol anti or proneurodegenerative properties in PD.