Derivatização e análise de ácidos carboxílicos de cadeia longa por cromatografia líquida de alta eficiência com detecção por fluorescência induzida por laser

Abstract

O perfil de ácidos carboxílicos, incluindo os ácidos graxos de cadeia longa, é um parâmetro importante em muitas disciplinas voltadas à saúde humana, à indústria alimentícia, ao estudo da expressão gênica em tecidos vegetais e muitos outros. Além disso, em muitas amostras biológicas, os ácidos graxos de cadeia longa ocorrem em baixas concentrações. Neste trabalho, o reagente 3-[4-(bromometil)fenil]-7-(dietilamino)cumarina (MPAC-Br) foi utilizado como reagente de derivatização para a análise de ácidos carboxílicos numa variedade de amostras. As reações de derivatização são sempre uma questão de preocupação nas análises de rotina, pois são vistas como uma etapa crítica e uma fonte de erros na química analítica. Algumas propriedades deste reagente foram estudadas no presente trabalho, incluindo a robustez da reação de derivatização, a estabilidade dos derivatizados, os limites de detecção e a repetibilidade dos resultados A versão otimizada do protocolo foi aplicada para determinar o conteúdo e perfis de ácidos graxos e ácidos graxos de cadeia longa em oito fontes de óleos e gorduras nas quais os resultados corresponderam ao que se encontra na literatura. O carbonato de propileno (CP) foi utilizado pela primeira vez como o principal solvente de derivatização para ácidos graxos. Os desvios padrões residuais (%) dos fatores de resposta relativos das corridas cromatográficas dos produtos das cinco reações de derivatização foram menores quando o CP foi utilizado (intervalo de 0,6 a 16,7%) em comparação com acetonitrila. A reação de derivatização com a etiqueta fluorescente proporcionou limites de detecção para os ácidos graxos na faixa de 0,68 a 2,87 nmol.L-1, o que representou um ganho considerável quando comparado aos métodos de detecção direta por absorção. O método proposto mostrou-se confiável, robusto, rápido e conveniente para a análise de ácidos graxos e ácidos graxos de cadeia longa.

The knowledge of fatty acid profiles, including long chain fatty acids, is an important parameter in many disciplines dedicated to human health, food sciences, the study of gene expression in plant tissues and many others. Moreover, in many biological samples, long chain fatty acids occur at low concentration. The 3-[4-(bromomethyl)phenyl]-7- (diethylamino)coumarin (MPAC-Br) reagent has been used as a derivatizing reagent for the analysis of carboxylic acids in a variety of samples. Derivatization reactions are always a matter of concern in routine analyses, because they are seen as a critical step and a source of errors in analytical chemistry. Some properties of this reagent were studied in the present work, including the robustness of the derivatization reaction, the stability of the derivatives, the limits of detection and repeatability of the results. The optimized version of the protocol was applied to determine the content and profiles of fatty acids and long chain fatty acids in eight sources of oils and fats in which the results corresponded to what is found in the literature. Propylene carbonate (PC) was used for the first time as major derivatization solvent for fatty acids. The residual standard deviations (%) of the relative response factors of chromatographic runs of the products of the five derivatization reactions were lower when PC was used (range of 0.6 to 16.7%) compared to acetonitrile. The fluorescence derivatization reaction provide detection limits for fatty acids in the range of 0.68 to 2.87 nmol L-1, which represented a considerable gain when compared to direct absorption detection methods. The proposed method proved to be reliable, robust, fast and convenient for the analysis of fatty acids and long chain fatty acids.