Estudo dos mecanismos relacionados com a formação de biofilmes por Pseudomonas fluorescens isoladas de leite cru de búfala

Abstract

Pseudomonas fluorescens é uma das bactérias psicrotróficas mais comumente isolada em leite cru e desempenha um papel importante na deterioração dos alimentos, pois são capazes de produzir enzimas termoresistentes e formar biofilmes. Este trabalho teve como objetivo explorar a capacidade de formação de biofilmes por duas cepas de P. fluorescens PL5.4 e PL7.1 provenientes de leite cru de búfala refrigerado. Para esta pesquisa foram realizados testes de proteólise, produção de exopolissacarídeos, ensaios de motilidade, avaliação da formação de biofilme em material de poliestireno e aço inoxidável, e por fim a visualização da estrutura do biofilme formado através de microscopia eletrônica de varredura. As duas cepas testadas apresentaram proteólise em ágar leite. Para a pesquisa de produção de exopolissacarídeo e ensaio de motilidade, estes foram ausentes ou fracamente produzidos pela cepa de P. fluorescens PL7.1 e produzidos em parte pela cepa de P. fluorescens PL5.4. As cepas foram capazes de formar biofilme em material de poliestireno, sendo a melhor condição evidenciada a temperatura de 7 °C pelo período de 72 horas. Para o teste de formação de biofilme em aço inoxídavel a cepa de P. fluorescens PL5.4 testada foi capaz de produzir biofilme e manter essa estrutura por até 72 horas em temperatura de refrigeração. Através da microscopia eletrônica de varredura foi possível observar o biofilme produzido pela cepa de P. fluorescens PL5.4 e sua forma plantônica, porém não foi possível observar produção de exopolissacarídeos e estruturas de motilidade. Considerando a origem das cepas é relevante salientar a importância da realização de procedimentos de limpeza e desinfecção para que se possa diminuir a contaminação por essas bactérias e prolongar a vida útil da matéria prima e seus derivados.

Pseudomonas fluorescens is one of the most commonly isolated psychotropic bacteria in raw milk and plays an important role in the deterioration of food because they are able to produce thermoresistant enzymes and to form biofilms. This work aimed to explore the biofilm formation capacity of two strains of P. fluorescens PL5.4 and PL7.1 buffalo raw milk in cooling tank. For this research were carried out tests of proteolysis, production of exopolysaccharides, motility tests, evaluation of the biofilm formation in polystyrene material and stainless steel, and finally the visualization of biofilm structure formed by scanning electron microscopy. The two isolates tested showed proteolysis in milk agar. For exopolysaccharides production and motility testing, these were absent or weakly respectively P. fluorescens PL7.1 strain and produced in part by the P. fluorescens PL5.4 strain. The strains were able to form biofilm in polystyrene material being a better condition evidenced at 7 °C for 72 hours. For the biofilm formation test in stainless steel the P. fluorescens PL5.4 strain was able to produce biofilm and maintain this structure for up to 72 hours at refrigeration temperature. Through scanning electron microscopy, it was possible to observe the biofilm produced by the isolate P. fluorescens PL5.4 and its planktonic form, but it was not possible to observe of production exopolysaccharides and motility structures. Considering the origin of the isolates, it is important to emphasize the importance of cleaning and disinfection so that contamination by bacteria can be reduced and extend a useful life of the raw material and its derivatives.