Análise da perda de heterozigosidade no lócus 9p21 e sua associação com a atividade proliferativa na carcinogênese bucal

Abstract

A carcinogênese na cavidade bucal é um processo de múltiplas etapas, apresentando alterações progressivas sobre o genoma celular. Portanto, o desenvolvimento do câncer na mucosa bucal muitas vezes é precedido por uma lesão potencialmente maligna. Os principais fatores de risco para o câncer bucal são o consumo de álcool e tabaco. O desafio atual é a busca de biomarcadores que demonstrem essas alterações precocemente, para que possam ser identificados os indivíduos de maior risco para o desenvolvimento do câncer bucal. Uma das primeiras alterações no processo de carcinogênese é o aumento da atividade proliferativa celular, geralmente causado por mutações nos genes que controlam o ciclo celular. O gene CDKN2A, localizado no lócus 9p21, é um gene comumente mutado nos cânceres humanos e codifica a proteína p16, que desempenha um papel crítico na regulação do ciclo celular. O objetivo deste trabalho foi avaliar a frequência de perda de heterozigosidade no lócus 9p21 e a atividade proliferativa celular na carcinogênese bucal. Para tal finalidade foi realizada a coleta citopatológica de indivíduos que foram divididos nos seguintes grupos: controle (n=22), álcool-fumo (n=27), leucoplasia (n=23) e grupo carcinoma (n=21). A partir do raspado citológico foi confeccionada uma lâmina para impregnação por prata e análise de AgNOR. O restante das células foi utilizado para extração do DNA para amplificação por PCR e sequenciamento. Observamos que os parâmetros de AgNOR e a frequência de mutações no lócus 9p21 foram maiores nos grupos expostos aos carcinógenos e com lesões em relação ao controle, com diferenças estatisticamente significativas nos valores de AgNOR dos pacientes com leucoplasias em relação ao controle. Os pacientes que apresentavam mutação em 9p21 apresentaram também maior velocidade de proliferação em relação aos pacientes sem mutações, embora essa diferença não tenha sido estatisticamente significativa. Concluímos que a citopatologia é um método útil para avaliação da atividade proliferativa e de mutações genéticas em pacientes com risco para transformação maligna em relação ao câncer bucal.

The carcinogenesis in the oral cavity is a multistep process, with progressive changes on the cellular genome. Therefore, the development of cancer in the oral mucosa is often preceded by a potentially malignant lesion. The main risk factors for oral cancer are alcohol and tobacco intake. The current challenge is the search for biomarkers that demonstrate the early alterations, so higher risk individuals to the development of oral cancer can be identified. One of the earliest changes in the carcinogenesis process is the enhancement of cell proliferative activity, usually caused by mutations in cell cycle control genes. The CDKN2A gene, located in the 9p21 locus, is a commonly mutated gene in human cancers and encodes the p16 protein, which plays a critical role in cell cycle regulation. The objective of this study was to evaluate the frequency of loss of heterozygosity in the 9p21 locus and the cell proliferative activity in oral carcinogenesis. For this purpose a cytopathologic collection was performed. The patients were divided into the following groups: control (n=22), alcohol-smoking (n=27), leukoplakia (n=23) and carcinoma group (n= 21). From the cytology, brush a slide for silver impregnation and AgNOR analysis was prepared. The remaining cells were used for DNA extraction, followed by PCR amplification and genetic sequencing. We observed that the AgNOR parameters and the frequency of9p21locusmutationswere higher in the groups exposed to carcinogens and injuries in the control. Higher statistically significant values of AgNORs were observed in Leukoplakia group in comparison to control. The patients with mutation in9p21also showed increased speed proliferation compared to patients without mutations, although this difference was not statistically significant. We conclude that the cytopathologyis a useful method to evaluate the proliferative activity and gene mutations in patients with risk for malignant transformation to oral cancer.