Análise neuroquímica de culturas de neurônios corticais do modelo Murino do transtorno de déficit de atenção e hiperatividade

Abstract

O Transtorno de Déficit de Atenção e Hiperatividade (TDAH) é um dos transtornos neuropsiquiátricos mais comuns da infância, e é caracterizado por sintomas de desatenção, hiperatividade e impulsividade. Atualmente, cerca de 5% da população infantil e 2,5% dos adultos no mundo todo são diagnosticados com TDAH. O TDAH é uma desordem neurocomportamental heterogênea e fenotipicamente complexa, e de causa ainda desconhecida. Como há muitas evidências que apontam para uma disfunção dopaminérgica, o uso de estimulantes como metilfenidato é o tratamento de primeira linha para tratar os sintomas do TDAH. Esse transtorno apresenta polimorfismos no transportador de dopamina (DAT) e no receptor D4 (DRD4), além de polimorfismos nos genes que codificam a proteína de 25 kDa associada ao sinaptossoma (SNAP-25) e a sinaptofisina. A redução na expressão do fator neurotrófico derivado do encéfalo (BDNF) e o aumento da sinalização da proteína de ligação ao AMPc (CREB) também podem desempenhar um papel na patogenia do TDAH. A cepa de ratos espontaneamente hipertensos (SHR, do inglês spontaneoulsy hypertensive rats) é um dos modelos animais mais validados para estudar o TDAH. Esses animais manifestam a hipertensão na vida adulta, no entanto, antes desse período, eles apresentam as principais características do transtorno de desatenção, hiperatividade e impulsividade. Com base nas alterações genéticas e proteicas encontradas no transtorno, torna-se importante verificar o impacto dessas modificações a nível neuronal. Sendo assim, o objetivo deste trabalho foi caracterizar o padrão de desenvolvimento neuronal utilizando a cepa de ratos SHR. Foi realizada uma cultura primária de neurônios corticais a partir de embriões de ratos SHR comparados ao seu controle Wistar-Kyoto. Através da técnica Western blot foram identificados o imunoconteúdo de determinadas proteínas, e através da imunocitoquímica foi realizada uma comparação morfométrica do desenvolvimento dos neurônios das linhagens primárias ao longo de diferentes dias in vitro. No primeiro dia in vitro verificou-se um aumento do imunoconteúdo da sinaptofisina no SHR quando comparado ao seu controle. Já o imunoconteúdo do CREB foi menor no SHR. No segundo dia in vitro o imunoconteúdo da SNAP-25 aumentou nos neurônios da linhagem SHR. No quinto dia in vitro o imunoconteúdo da sinaptofisina foi maior na SHR, enquanto que o imunoconteúdo da SNAP-25 e do pro-BDNF foram menores na SHR. Com relação aos parâmetros morfométricos, a linhagem SHR apresentou uma redução no comprimento total nos dias in vitro 2, 5 e 8. Na análise do número de raízes, houve redução deste parâmetro na linhagem SHR nos dias in vitro 2 e 8. Não houve diferença significativa entre as linhagens no número de raízes e no número de pontos de ramificação em nenhum dos dias in vitro analisados. Esses resultados corroboram com estudos anteriores no que diz respeito a alterações de proteínas essenciais para o desenvolvimento e sobrevivência neuronal em um dos modelos animais mais validado para estudar o TDAH. O estudo morfométrico realizado fornece novas perspectivas para a compreensão de diferenças no desenvolvimento verificadas nos neurônios corticais de ratos SHR quando comparados ao seu controle.