Utilização de lipídio catiônico para neutralização da carga de DNA e aplicação do complexo na imunização de camundongos.

Abstract

Embora a imunização gênica apresente vantagens sobre as vacinas convencionais, nem sempre a produção de anticorpos e a conseqüente proteção conferida pelo sistema imune contra o antígeno de interesse são satisfatórias. As causas da baixa eficácia da imunização gênica, nestes casos, ainda são pouco conhecidas, porém um dos pontos mais relevantes em todo o processo é a eficiência da transfecção do DNA. O sucesso desta metodologia depende do estabelecimento de um sistema de entrega de gene eficiente e seguro. De acordo com a teoria proposta de Kuhn et al. (1999), baixas concentrações de moléculas anfifílicas podem ser usadas para neutralizar a carga do DNA, sem a formação de lipossomos. Este trabalho teve como objetivo avaliar o uso do lipídio catiônico dimetildioctadecil brometo de amônio (DDAB) como neutralizador da carga do DNA para a imunização de camundongos. Para a realização dos experimentos, um plasmídeo expressando a proteína do capsídeo (CA) do vírus da artrite encefalite caprina (CAEV), sob o comando do promotor citomegalovírus humano (CMV), foi utilizado nas imunizações. Os camundongos foram divididos em cinco grupos e receberam, via subcutânea, três inoculações de 10 μg de DNA linear (grupo 1), DNA linear mínimo (grupo 2), DNA circular (grupo 3) associados a 2,7 μg de DDAB ou DNA circular nu (grupo 4). O grupo controle foi inoculado com 2,7 μg de DDAB em solução fisiológica. Os camundongos imunizados com o plasmídeo na forma linear associado ao DDAB apresentaram maiores títulos de anticorpos CA que os inoculados com a forma circular ou linear mínima. Os dados sugerem que o lipídio catiônico DDAB tem potencial de uso como veículo de transfecção gênica em animais.

Genetic immunization has several advantages over conventional vaccines. However, antibody production and protection against the antigen of interest are often not satisfactory. In these cases, the causes of the low effectiveness of the genetic immunization are still poorly understood. One of the most relevant points in the immunization process is the DNA delivery. A successful DNA vaccine depends on the establishment of an efficient and safe gene delivery system. In accordance with Kuhn et al. (1999), low concentrations of amphiphilic molecules can be used to neutralize the DNA charge without the formation of liposomes. The aim of this study was to examine the effect of cationic lipid dimethildioctadecyl-ammonium bromide (DDAB) as a charge neutralizer for DNA for the immunization in mice. A plasmid expressing the capsid protein (CA) of caprine arthritis encephalitis virus (CAEV) under the control of the human cytomegalovirus immediate early promoter (hCMVie1) was used in the immunization. Mice were grouped and immunized with three injections of either 10 μg of linear DNA (group 1), minimal linear DNA (group 2) or circular DNA (group 3) associated with 2,7 μg of DDAB or naked circular DNA (group 4). The control group received 2,7 μg of DDAB diluted in physiologic solution. Mice immunized with DNA in linear form associated with DDAB developed higher titers of antibodies against CA than the animals immunized with the circular or minimal linear form. The data suggest that lipidic cationic DDAB could be a useful delivery system for genetic immunization.