Avaliação de Campylobacter jejuni e Campylobacter coli em etapas do processamento de frangos de corte

Abstract

Campylobacter jejuni e Campylobacter coli têm sido associados a problemas gastroentericos em seres humanos, principalmente devido ao consumo de carne de frango. Embora medidas de controle sejam adotadas para mitigar o risco de contaminação por estas bactérias, a contaminação cruzada no processo corrobora para o aumento da prevalência de Campylobacter em produtos avícolas, além da diversidade genotípica que permite que alguns isolados possuam melhores condições para se disseminar e causar doenças. No primeiro trabalho foram realizadas avaliações em 13 diferentes pontos ao longo do processo de abate, da recepção dos frangos na plataforma até a refrigeração das carcaças em 12 lotes independentes. A presença foi caracterizada pelo método de cultivo microbiológico (ISO 10272-1:2006) e a quantificação por Número Mais Provável (NMP), com confirmação de C. jejuni e C. coli através da técnica de Multiplex-PCR. Paralelamente foi utilizado Real Time PCR para identificar e quantificar Campylobacter jejuni, Campylobacter coli e Campylobacter lari. A ocorrência de Campylobacter nos lotes foi de 83% em concordância com os ensaios microbiológico convencional e molecular. C. jejuni foi a espécie isolada com maior frequência através do uso do multiplex-PCR. Através do isolamento microbiológico e do uso da Real Time PCR, respectivamente foram identificados 67% e 50% dos lotes positivos na plataforma de recepção e 67 e 75% de carcaças resfriadas. As principais variáveis identificadas através da quantificação pelo NMP/mL de Campylobacter spp. foram o ponto 6 (carcaça após a depenagem, antes da lavagem) e o ponto 8 (carcaça após evisceração, antes da lavagem) e importante correlação entre o suabe de cloaca com os estágios: carcaça após a depenagem, depois da lavagem; carcaça após evisceração, antes da lavagem e carcaça após a lavagem final. Este aumento da contaminação foi significativo com incremento diretamente proporcional à positividade e concentração bacteriana nas carcaças refrigeradas. O uso da lavagem das carcaças após estes dois estágios influenciaram diretamente na redução da contaminação porém a passagem pelo chiller aumentou a contaminação. No segundo trabalho foram analisadas 105 carcaças pelo isolamento microbiológico de C. jejuni e C. coli em cinco abatedouros sob Inspeção Federal no sul do Brasil em 2012 e nos três primeiros meses de 2013. Campylobacter spp. foram isolados de 37,1% das carcaças analisadas com variação entre matadouros de zero a 71,4%. Das amostras positivas, 97,5% foram caracterizadas como C. jejuni e 2,5% como C. coli. No terceiro trabalho foram coletados cortes de frangos para verificar a ocorrência de Campylobacter e genes associados a virulência. Das amostras analisadas, 17 (40,48%) foram positivas para Campylobacter jejuni, única espécie identificada. As amostras de coxas e asas apresentaram os cortes com maior e menor ocorrência com 87,5% e 12,5% respetivamente. Dos isolados, 29 (82,85%) foram positivas para todos os três genes do cluster CDT - cdtA, cdtB, cdtC e positivos para o cluster CDT mais o gene flaA totalizaram 25 (71,42%). A identificação de genes relacionados com a virulência não garante que a amostra seja patogênica, porém estes são fatores identificados como relevantes em isolados de casos clínicos e para esclarecer a patogênese da campilobacteriose.

Campylobacter jejuni and Campylobacter coli have been associated to gastrointestinal disorders in human being, mainly due to poultry meat consumption. Although methods of control have been adopted in order to mitigate risk of contamination from these bacterias, cross contamination on process helps for increasing prevalence of Campylobacter in poultry products, besides genotype diversity, which allows that some strains have better conditions for disseminating and causing diseases. In the first work have been performed evaluations in thirteen different places throughout slaughtering process, from poultry receipt until chilling of carcass in twelve independent flocks. Presence and absence have been evaluated through microbiology assay (ISO 10272-1:2006) and quantification through Most Probable Number, with confirmation of C. jejuni and C. coli through Multiplex-PCR assay. Simultaneously it has been used Real Time PCR in order to identify and quantify Campylobacter spp. Occurrence of Campylobacter in flocks was of 83% in agreement with both of essays. C. jejuni was an isolated specie with largest frequency through usage of Multiplex-PCR. Through mibrobiology assay isolation and Real Time PCR assay, respectively have been identified 67% and 50% of positive flocks on reception deck and 67% and 75% of carcass after chilling. The main variants identified through quantification by NMP/mL of Campylobacter spp. were step 6 (poultry after defeathering but before washing) and step 8 (carcass after evisceration but before washing). Significant correlation between the cloacal swab with the stages: poultry after defeathering but before washing; carcass after evisceration but before washing and substrate, and carcass after the final wash. This increase of contamination was significant with increment directly proportional to positivity and bacterial concentration on chilled carcasses. Usage of carcass washing after these two stages influence directly in a reduction of contamination, however chiller stage enabled contamination increase in both performed tests. In the second work have been analyzed 105 carcasses through horizontal detection method of C. jejuni and C. coli in five slaughterhouses under Federal Inspection in south of Brazil in 2012 and in the first three months of 2013. Campylobacter spp. have been isolated in 37,1% out of analyzed carcasses with a variation among slaughterhouses from zero to 71,4%. From positive samples, 97,5% were characterized as C. jejuni and 2,5% as C. coli. In the third work were collected chicken retail in order to verify an occurrence of Campylobacter and virulence-associated genes isolated of these samples. From analyzed samples, 17 (40,48%) were positive for Campylobacter jejuni, unique identified specie. Thighs and wing samples showed higher and lesses occurrence of Campylobacter spp., with 87,5% and 12,5%. The strain identification 29 (82,85%) were positive for all of the three genes of cluster CDT plus flaA gene totalized 25 (71,42%). Identification of these genes related to virulence does not assure that a sample will be pathogenic, however these are factors identified as important in isolated clinical cases and for clarifying pathogenesis of campylobacteriosis.