Expressão da proteína GRP78 na carcinogênese bucal

Abstract

O câncer bucal se caracteriza por um crescimento desordenado e descontrolado de células, invadindo os tecidos adjacentes e formando massas tumorais malignas. É uma doença multifatorial, mas os principais fatores de risco são hábitos como fumo e consumo de álcool. A carcinogênese se inicia após a célula acumular alterações que a façam perder a capacidade de indução da apoptose associada a uma proliferação intensa e descontrolada. O retículo endoplasmático e a via “unfolded protein response” (UPR) desempenham papel importante nesse mecanismo. A super- expressão da proteína GRP78 (reguladora da ativação da UPR) já foi detectada em vários tipos de câncer, associada a um fenótipo mais agressivo e um pior prognóstico. A ativação da UPR está associada a maior agressividade e maior resistência ao tratamento anti-tumoral. O ácido Docosahexaenóico (DHA) que faz parte do Ômega 3 surgiu como opção terapêutica devido à sua atividade pró-apoptotica, em parte por regular a expressão de GRP78 em células cancerígenas. O objetivo deste projeto é avaliar a via UPR na carcinogênese bucal e o efeito terapêutico do DHA no câncer bucal. Por meio de modelo animal, com ratos wistar. Os animais foram divididos em 3 grupos: controle (Grupo 1 n=28), indução de carcinogênese (Grupo 2 n=30), indução de carcinogênese associada ao tratamento com óleo de peixe enriquecido com DHA (Grupo 3 n=30). A carcinogênese foi induzida com associação de álcool e 4NQO, trataremos os animais com óleo de peixe enriquecido com DHA e avaliamos o desenvolvimento de tumor em língua durante 8, 15 e 20 semanas, assim realizaremos análises morfológicas (HE) e imunohistoquímica (para identificar GRP78). Em relação às alterações histopatológicas, no tempo 8 semanas foram diagnosticadas alterações epiteliais de hiperplasia epitelial e/ou hiperceratose em 5 e 7 animais dos grupos 2 e 3 respectivamente. Em 15 semanas, 81,82% e 98,91% dos animais apresentavam alterações epiteliais dos grupos 2 e 3 respectivamente. No tempo de 24 semanas, já foi possível identificar displasias epiteliais em mais de 90% dos animais onde a carcinogênese foi induzida. A expressão de GRP78 aumentou ao longo do processo de carcinogênese, enquanto no grupo controle os níveis de GRP78 se mantiveram estáveis. Apesar de não ser significativo, nos tempos de 8 e 15 semanas a expressão de GRP78 foi menor no grupo que recebeu DHA. No entanto, em 24 semanas os grupos testes apresentaram expressão semelhante. A administração de óleo de peixe enriquecido em DHA não alterou a carcinogênese em língua de ratos, entretanto, podemos concluir que durante a carcinogênese bucal ocorre um aumento progressivo dos níveis proteicos da chaperona GRP78 e que a suplementação com DHA diminui os níveis de GRP78 por um período limitado do processo, o que pode favorecer o desaceleramento da carcinogênese, mas não a inibição.

Oral cancer is characterized by a disordered and uncontrolled growth of cells, invading adjacent tissues and forming malignant tumor masses. It is a multifactorial disease, but the main risk factors are habits such as smoking and alcohol consumption. Carcinogenesis begins after the cell accumulates changes that make it lose the apoptosis induction capacity associated with intense and uncontrolled proliferation. The endoplasmic reticulum and the unfolded protein response (UPR) play an important role in this mechanism. The overexpression of the GRP78 protein (regulator of UPR activation) has already been detected in several types of cancer, associated with a more aggressive phenotype and a worse prognosis. Activation of UPR is associated with greater aggressiveness and greater resistance to anti-tumor treatment. Docosahexaenoic acid (DHA) that is part of Omega 3 has emerged as a therapeutic option due to its pro-apoptotic activity, in part by regulating GRP78 expression in cancer cells. The objective of this project is to evaluate the UPR pathway in oral carcinogenesis and the therapeutic effect of DHA on oral cancer. By means of an animal model, with 86 wistar rats. The animals were divided into 3 groups: control (Group 1 n=28), induction of carcinogenesis (Group 2 n=30), induction of carcinogenesis associated with treatment with fish oil enriched with DHA (Group 3 n=30). Carcinogenesis was induced with the alcohol association and 4NQO, we will treat the animals with fish oil enriched with DHA and evaluate the development of tumor in tongue for 8, 15 and 20 weeks, thus performing morphological analyzes (HE) and immunohistochemistry (to identify GRP78). Regarding histopathological alterations, at the time 8 weeks, epithelial hyperplasia and/or hiperkeratosis were diagnosed in 5 and 7 animals from group 2 and 3 respectively. At 15 weeks, 81.82% and 98.91% of the animals presented epithelial alterations in groups 2 and 3 respectively. At the time of 24 weeks, it has been possible to identify epithelial dysplasia in more than 90% of the animals where carcinogenesis was induced. GRP78 expression increased throughout the carcinogenesis process, while in the control group GRP78 levels remained stable. Although not significant, at 8 and 15 weeks the expression of GRP78 was lower in the group that received DHA. However, at 24 weeks the test groups showed similar expression. Fish oil enriched with DHA treatment does not change tongue carcinogenesis, however, we can conclude that during oral carcinogenesis there is a progressive increase in protein levels of the chaperone GRP78 and that supplementation with DHA decreases GRP78 levels for a limited period of the process, which may favor the slowdown of carcinogenesis, but not inhibition.