Variabilidade genética em populações naturais de erva-mate (/lex paraguariensis St. Hil., Aquifoliaceae) usando marcadores RAPD

Abstract

llex paraguariensis, popularmente conhecida como erva-mate, é uma espécie nativa da América do Sul, sendo encontrada nos estados do sul do Brasil, Paraguai, Argentina e Uruguai. Estas plantas são arbéreas, perenes de vida longa, com 40 cromossomos e dióicas com fecundagio cruzada obrigatéria. Além de seu uso no chimarrdo e no tereré, existem outras possibilidades de aplicacées e usos da erva-mate, como na produgéo de bebidas enlatadas/engarrafadas, chas soliveis, cosméticos, — corantes, medicamentos — (anti-inflamatórios, anti-reumáticos, moderadores de apetite, etc.) e como fonte de cafefna. Apesar de sua grande importancia socio-econémica, muito pouco se conhece sobre sua biologia e principalmente sobre sua variabilidade genética. A presente pesquisa teve como objetivo avaliar a variabilidade genética intrapopulacional e o grau de divergéncia entre quatro populagGes de /. paraguariensis (Mato Grosso do Sul -MS, Paraná - PR, Santa Catarina -SC e Rio Grande do Sul -RS) através de marcadores RAPD (“random amplified polymorphic DNA”). O DNA das plantas individuais foi extraido de folhas de plantas adultas usando a técnica de extração de DNA total de CTAB modificada. O DNA de cada planta foi amplificado em um volume de 25 ul contendo o tampão de reação (Tris HCl 10 mM pH 9,0, KCL 50 mM e MgCl, 1,5mM), 0,025 mg de BSA, 200 uM de cada um dos dNTPs, “primers” 0,2 uM, 1 unidade de TAQ DNA polimerase e 35 ng de DNA genémico. As amplificagdes ocorriam com um ciclo inicial de 3 minutos a 94°C, seguido de 45 ciclos de 1 minuto a 94°C , Iminuto a 36°C e 2 minutos a 72°C e um ciclo final de 5 minutos a 72°C. Quinze “primers” da Operon Technologies, Inc. foram utilizados na análise de 43 individuos da população do MS, 35 do PR, 31 de SC e 39 do RS.

llex paraguariensis, popularly named maté, is a plant species native from South America, common in the Southern States of Brazil, Paraguay, Argentina, and Uruguay. They are perennial with a long lifespan, arboreous, dioecious with obligatory cross-fertilizing plants and with 40 chromosomes. Besides its use in the “chimarrao” and “tereré”, many other applications and uses in different products as canned drinks, soluble teas, cosmetics, colorings, medicinal drugs (anti- inflammatory, anti-theumatic, appetite moderators, etc.), as a caffein source, etc. are now known. Despite their great socioeconomic importance, their biology and especially their genetic variability have not yet been fully established. The present research aims to assess intrapopulational genetic variability and the degree of divergency among four native populations of /lex paraguariensis from Mato Grosso do Sul (MS), Paraná (PR), Santa Catarina (SC), and Rio Grande do Sul (RS) by RAPD (random amplified polymorphic DNA) markers. The DNA of individual plants was extracted from leaves of adult plants using CTAB method. The polymerase chain reactions (PCR) were performed in a 25ul volume containing the reaction buffer 10mM Tris-HCI pH8.3, 1.5mM MgCl,, 200M of each dNTP, 2uM primer, 1 unit of Taq DNA polymerase, 0.025mg of BSA, and 35 ng of template DNA. The thermal cycle used was 94°C for 3 min; then 45 cycles of 94°C for 1 min, 36°C for 1 min, and 72°C for 2 min; and a last cicle of 72°C for 5 min. Fifteen primers supplied by Operon Technologies, Inc. were used in the analysis de 43 plants from MS, 35 from PR, 31 from SC and 39 from RS.